抗病毒試驗(yàn)是一種藥理實(shí)驗(yàn)方法,通過(guò)測(cè)定待測(cè)樣本和對(duì)照樣本中病毒的減少量來(lái)評(píng)估其抗病毒活性。
抗病毒活性試驗(yàn)的步驟包括:
樣品制備:將待測(cè)樣本制備成5×5 cm的正方形,并將一定量的病毒液滴加到每一塊待測(cè)樣本和對(duì)照樣本上。
病毒滴度測(cè)定:將洗脫回收的病毒接種到96孔板的細(xì)胞上,并進(jìn)行10倍梯度稀釋,且每個(gè)稀釋梯度不少于4個(gè)復(fù)孔。將96孔板放入37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)3~7天記錄細(xì)胞病變的情況,計(jì)算測(cè)試表面的抗病毒率。
病毒抑制試驗(yàn):計(jì)算待測(cè)樣本相對(duì)于對(duì)照樣本上病毒的減少量,這種減少量被稱為R值,是比較對(duì)照樣本和測(cè)試樣本中回收的病毒量之間的差異,都以10為底的對(duì)數(shù)值表示。
抗病毒試驗(yàn)項(xiàng)目包括病毒血清學(xué)試驗(yàn)、病毒分離和鑒定、病毒抗體檢測(cè)、病毒基因序列分析等。
病毒血清學(xué)試驗(yàn)是檢測(cè)病毒的抗原或者抗體的試驗(yàn),如果檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性,可能提示機(jī)體被病毒感染。其檢查項(xiàng)目根據(jù)不同的病毒而定,臨床上常用于檢測(cè)乙肝病毒、丙肝病毒、艾滋病病毒等微生物的感染情況。
常用的病毒試驗(yàn)項(xiàng)目包括:
乙肝兩對(duì)半:用來(lái)檢查是否感染乙肝病毒,乙肝五項(xiàng)包括乙肝表面抗原、乙肝表面抗體、乙肝e抗原,以及乙肝e抗體和乙肝核心抗體。如果表面抗原陽(yáng)性,則說(shuō)明感染乙肝病毒,如果同時(shí)存在乙肝e抗原陽(yáng)性、乙肝核心抗體陽(yáng)性,說(shuō)明是大三陽(yáng),如果乙肝e抗原呈陰性,乙肝e抗體和乙肝核心抗體為陽(yáng)性,提示為小三陽(yáng)。
丙肝抗體檢測(cè):如果檢查丙肝抗體陽(yáng)性,提示感染過(guò)丙肝病毒,但不能鑒別是現(xiàn)在感染,還是既往感染,因此需要進(jìn)一步檢測(cè),診斷是否存在丙肝,以便于及時(shí)進(jìn)行治療。
艾滋病毒:通過(guò)檢測(cè)人體內(nèi)是否含有特異性抗艾滋病病毒抗體,間接診斷機(jī)體是否有艾滋病病毒感染。艾滋病病毒侵入機(jī)體后,刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng),產(chǎn)生特異性抗體,當(dāng)在體內(nèi)檢測(cè)出該抗體,說(shuō)明感染艾滋病病毒。
抗病毒試驗(yàn)方法可分為三種:
雞胚法:利用許多病毒能在雞胚中繁殖及引起病變,測(cè)定藥物的抗病毒作用。
整體動(dòng)物法:觀察投入藥物的感染病毒動(dòng)物的病變、死亡及存活數(shù),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)算,可得拜藥物對(duì)病毒是否有效。
組織培養(yǎng)法:幾乎所有的人類病毒都可在離體細(xì)胞中生長(zhǎng)繁殖,實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢驗(yàn)藥物能否保護(hù)細(xì)胞免受病毒感染,可得知該藥物杭病毒的效果。
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