我國(guó)主要的幾種檢測(cè)試劑盒都是基于RT-PCR原理。由于需求檢測(cè)的病毒樣本濃度有高有低,高的容易檢測(cè),低濃度就會(huì)漏掉。所以PCR的方法就把病毒基因擴(kuò)增很多倍,到達(dá)可以檢測(cè)出來的濃度?;静僮魅缦拢? 01 搜集咽拭子等病毒樣本,經(jīng)過試劑打碎維護(hù)病毒的蛋白質(zhì)殼子,萃取病毒RNA。一方面是萃取,另一反面,打碎之后就沒有了感染性,相對(duì)平安一些。
02 由于這次新冠肺炎是單鏈RNA病毒,所以要先轉(zhuǎn)換成cDNA。這個(gè)可以類比像是視頻文件,mp4,rmvb,avi這些都是罕見格式,同一個(gè)視頻不同格式,意思都一樣,可以相互轉(zhuǎn)換。
03 慣例PCR反響,加熱到94℃把DNA拉鏈拉開,之后再55℃-60℃讓引物,就是拉鏈扣區(qū)分套在兩條拉鏈上,再升溫到72℃讓拉鏈自己復(fù)制,用左拉鏈做模板造一個(gè)右拉鏈,用右拉鏈做模板造一個(gè)左拉鏈。這樣折騰一次為一個(gè)循環(huán),RNA數(shù)量翻一倍。之后再折騰25-30次。這樣就算很大批的病毒這個(gè)時(shí)分也顯現(xiàn)出來了。
PCR操作方法 這個(gè)方法很主流,也很經(jīng)典。但是這個(gè)操作步驟太多,而且每次都是微量,手一抖就完蛋了。另外引物(就是拉鏈扣)的質(zhì)量也是關(guān)鍵,假設(shè)復(fù)制錯(cuò)了拉鏈,那么整個(gè)檢測(cè)前功盡棄。 當(dāng)然還無機(jī)器清洗的效果,假設(shè)上一個(gè)陽(yáng)性樣本檢測(cè)之后,沒有洗潔凈設(shè)備,下一個(gè)原本陰性患者能夠就會(huì)假陽(yáng)性被誤診。中國(guó)大三甲醫(yī)院自己都有PCR檢測(cè)和人員,流程比擬熟練。美國(guó)歐洲很多醫(yī)院偏??疲C合性超大型少一些,原本很多檢驗(yàn)都是委托外包第三方實(shí)驗(yàn)室。遇到疫情,著急出結(jié)果自己上手,能夠有手法不熟練的狀況。假設(shè)又正好運(yùn)用了某些中國(guó)的無證試劑盒廠商出品的無證試劑,多重誤差疊加,準(zhǔn)確度就會(huì)崩盤。 那么雅培檢測(cè)試劑盒和國(guó)際主流試劑盒有啥不一樣呢? 這次雅培的五分鐘檢測(cè)試劑盒用的是一個(gè)完全不同的反響體系,簡(jiǎn)稱RPA(重組酶聚合酶擴(kuò)增),也叫做恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。中心就是用三個(gè)主要原料:單鏈核酸重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶,在一個(gè)恒定溫度下37度到42度都可以,直接把DNA套成一個(gè)環(huán),在本地施任務(wù)業(yè),直接套用引物,復(fù)制目的DNA。 RPA技術(shù)優(yōu)勢(shì)很清楚: 01 特別快,傳統(tǒng)PCR要45分鐘,由于要重復(fù)升溫降溫。RPA由于是恒溫,所以只需求3-10分鐘。
02 靈敏度高,由于是高度定向擴(kuò)增,所以樣品即使有點(diǎn)兒雜質(zhì)也OK,免除了前處置環(huán)節(jié),盡量多的保管了樣本。
03 溫度控制要求低,普通是加熱到40℃,但是在緊急狀況下,貼在人身上用人體的體溫36℃、37℃也沒效果。甚至在室溫25℃,也是可以運(yùn)轉(zhuǎn),就是慢點(diǎn)兒,要等一個(gè)小時(shí)而已。
04 適用性強(qiáng),面對(duì)RNA病毒,直接在試劑里參與逆轉(zhuǎn)錄酶就好,一鍋端。
益處是很多,但是畢竟RPA也只能設(shè)計(jì)兩個(gè)引物,假設(shè)設(shè)計(jì)不好,能夠就會(huì)錯(cuò)誤的把其他病毒錯(cuò)檢成新冠。但是雅培果真行業(yè)大佬,設(shè)計(jì)巧奪天工,對(duì)照實(shí)驗(yàn)中基本面對(duì)少量其他病毒,都沒有發(fā)生錯(cuò)誤。
反過去,RPA由于太靈敏,之前的樣本有一點(diǎn)兒殘留在機(jī)器里,下一個(gè)樣本就不準(zhǔn)了。所以雅培的設(shè)計(jì)是徹底的全封鎖一次性試劑盒。機(jī)器和樣本不直接接觸,只要激光掃碼這一塊。一切的試劑盒全部都是一次性運(yùn)用,并且外部封鎖樣本處置。這樣就防止了樣品交叉污染,由此可以釋放檢測(cè)才干,縱情地檢測(cè)更低濃度的病毒。因此可以釋放檢測(cè)才干,縱情去檢測(cè)低濃度病毒。
好東西值得吹噓。畢竟一次只能檢測(cè)一個(gè),關(guān)于窮人和偏遠(yuǎn)地域是OK。但是關(guān)于大規(guī)模檢測(cè)的中央,比如說美國(guó)方艙醫(yī)院,PCR方案短期內(nèi)還是沒法被替代。 引文: 1, Abbott RealTime SARS-CoV-2 For use under an Emergency Use Authorization (EUA) Only http://www.fda.gov/media/136258/download 2,ID NOW? http://www.alere.com/en/home/product-details/id-now.html 3,重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)研討停頓 http://html.rhhz.net/SWJSTB/html/2016-6-47.htm 靠譜的安康醫(yī)療科普節(jié)目
新冠檢測(cè)試劑盒的正確率究竟如何??如何看待美國(guó)一只老虎新冠病毒檢測(cè)呈陽(yáng)性??健明迪檢測(cè)
*大宗師:也就是不樣病毒繼續(xù)開展。就像艾滋病的阻斷藥一樣,不是*藥。你聽說過艾滋病有*藥嗎? 即使是說治愈出院了,后遺癥有沒有?能不...米團(tuán):確實(shí)沒有找到確實(shí)證據(jù),我們也不能拿人做實(shí)驗(yàn),但是可以測(cè)試下實(shí)驗(yàn)中的貓染病后,能否傳染給恒河猴?不過覺得沒人會(huì)做這個(gè)費(fèi)力不討好的實(shí)驗(yàn),指...新冠檢測(cè)試劑盒的正確率究竟如何??如何看待美國(guó)一只老虎新冠病毒檢測(cè)呈陽(yáng)性??健明迪檢測(cè)
沒有。這就似乎老婆餅里沒有老婆一樣。
感謝約請(qǐng),我是王醫(yī)生,從事艾滋病防治任務(wù)多年,也是一名心思咨詢師。
當(dāng)然,有相似疑惑的冤家不止你一個(gè)。甚至經(jīng)常有恐艾的冤家問王醫(yī)生說,自己在自測(cè)的進(jìn)程中,由于擔(dān)憂血液不夠,就直接用傷口觸碰到了試紙,這樣會(huì)不會(huì)感染艾滋???
答案一定不會(huì),無論是尿液檢測(cè)試紙,還是血液檢測(cè)試紙,亦或是牙齦滲出液檢測(cè)試紙,外面都沒有艾滋病毒。
而要想回答這個(gè)效果,我們要先了解試紙檢測(cè)的原理,比如用來檢測(cè)抗體的試紙,在試紙上包埋的是抗原,用來檢測(cè)抗原的試紙,在試紙上包埋的是抗體。那怎樣判別什么狀況是陰性,什么狀況是陽(yáng)性呢?
我們可以做個(gè)類比,這就好比我們中學(xué)學(xué)到的化學(xué)反響,比如碘遇淀粉變藍(lán),酚酞遇堿變成粉白色一樣。假設(shè)體內(nèi)有抗體,也就是說曾經(jīng)感染了艾滋病毒,抗體在遇到試紙上的抗原時(shí)就會(huì)在T區(qū)(T的全稱是TEST,也就是實(shí)驗(yàn)區(qū),同時(shí)還有C區(qū),全稱是CONTROL,是為了驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)?zāi)芊裼行У目刂茀^(qū))發(fā)作顯色反響。同理,假設(shè)體內(nèi)有抗原,再遇到試紙上的抗體就會(huì)變紅。
當(dāng)然,目前大多試紙是檢測(cè)體內(nèi)抗體的,也就是試紙上包埋的是抗原。也有同時(shí)檢測(cè)抗原和抗體的,試紙上就包埋了兩種物質(zhì)。
那試紙上的抗原抗體能否具有傳染性呢?實(shí)踐上,深刻了解,抗原、抗體是病毒撫慰人體發(fā)生的物質(zhì),不具有病毒的生物活性,也就不具有致病的才干。而且試紙包埋的抗原、抗體屬于人工重組抗原、抗體,經(jīng)過生物學(xué)處置,和人體感染病毒后真正發(fā)生的抗原抗體還有一些區(qū)別,平安性很好。
換個(gè)角度講,假設(shè)試紙有潛在傳染疾病的能夠,那國(guó)度早就不允許試紙消費(fèi)和銷售了。一種檢測(cè)技術(shù),它發(fā)揚(yáng)篩查功用的前提是首先要保證平安性。這就和疫苗相似,一種新疫苗在消費(fèi)出來以后,上市以前,*個(gè)實(shí)驗(yàn)就是平安性實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證它對(duì)人體能否足夠平安。其次才是免疫原性實(shí)驗(yàn),也就是驗(yàn)證它能否能發(fā)生維護(hù)性抗體。接著才是有效性實(shí)驗(yàn),也就是維護(hù)性抗體能否能使接種者免受傳染病侵?jǐn)_。
總結(jié)起來,檢測(cè)試紙是平安的,不含有艾滋病毒,不會(huì)傳染艾滋病,可以擔(dān)憂運(yùn)用。
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