推薦閱讀：抗菌制品檢測 5.2抗菌效果
5.2.1懸液定量殺菌試驗
5.2.1.1適用范圍
適用于液體抗菌產(chǎn)品（如液體抗菌液、抗菌噴霧劑等）對微生物抗菌效果的測定。
5.2.1.2試劑、培養(yǎng)基及器材
中和劑(用PBS配制)，其它見5.1.1.2。
5.2.1.3菌懸液配制
取試驗菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5.0×105CFU/mL～4.5×106CFU/mL菌懸液備用。
5.2.1.4中和劑鑒定試驗
5.2.1.4.1分組
第1組：5.0mL中和劑+0.1mL菌懸液→培養(yǎng)
第2組：（0.5mL抗菌劑+4.5mL中和劑）+0.1mL菌懸液→培養(yǎng)
第3組：5.0mL稀釋液+0.1mL菌懸液→培養(yǎng)
第4組：稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基→培養(yǎng)
5.2.1.4.2步驟
根據(jù)試驗分組，準備試管和平皿，進行編號。
第1組：取5.0mL中和劑，置20℃±1℃水浴中10min后，加入0.1mL試驗菌懸液，混勻，作用10min，用中和劑做10倍系列稀釋，選適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。
第2組：取4.5mL中和劑于試管內(nèi)，加入0.5mL抗菌劑，混勻，置20℃±1℃水浴中10min制成中和產(chǎn)物，加入0.1mL試驗菌懸液，混勻，作用10min，用中和產(chǎn)物做10倍系列稀釋，選適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。
第3組：取5.0mLPBS，置20℃±1℃水浴中10min，加入0.1mL試驗菌懸液，混勻，作用10min，用PBS做10倍系列稀釋，選適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種2個平皿，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。
第4組：分別吸取稀釋液（PBS）、中和劑各1.0mL于同一無菌平皿內(nèi)，倒入上述試驗同批次的培養(yǎng)基15mL～20mL，作為陰性對照組培養(yǎng)觀察。
5.2.1.4.3結(jié)果判定
第1、2、3組有相似量試驗菌生長，且菌量在1.0×104CFU/mL～9.0×104CFU/mL；計算組間菌落數(shù)誤差率，其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過15%；第4組無菌生長，否則，說明試劑有污染，應(yīng)更換無污染的試劑重新進行試驗。
試驗重復3次，每次試驗均應(yīng)符合以上要求。
5.2.1.5試驗步驟
取無菌試管，先加入5.0mL抗菌劑（說明書規(guī)定的使用濃度），置20℃±1℃水浴中5min后，再加入0.1mL試驗用菌懸液，迅速混勻并立即計時。
待試驗菌與抗菌劑相互作用至各預定時間（以說明書規(guī)定時間為T，時間分別為0.5T，T，1.5T），分別吸取0.5mL試驗菌與抗菌劑混合液加于4.5mL中和劑中，混勻。
各管試驗菌與抗菌劑混合液經(jīng)中和劑作用10min后，分別吸取1.0mL樣液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時，可用PBS進行10倍系列稀釋后，再進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。
同時用PBS代替消毒液，進行平行試驗，作為陽性對照。陽性對照回收菌落數(shù)在1.0×104CFU/mL～9.0×104CFU/mL。取同批次稀釋液、中和劑、培養(yǎng)基作陰性對照。
所有試驗樣本和對照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng)，對細菌繁殖體培養(yǎng)48h觀察最終結(jié)果；對白色念珠菌需培養(yǎng)72h觀察最終結(jié)果。試驗重復3次，計算殺菌率。
5.2.1.6結(jié)果判定
說明書規(guī)定時間的殺菌率≥90%，判有抗菌作用；說明書規(guī)定時間的殺菌率≥99%，判為較強抗菌作用。

5.2.2載體浸泡定量殺菌試驗
5.2.2.1適用范圍
適用于粘稠狀（半固體）抗菌產(chǎn)品如抗菌洗手液、抗菌沐浴露、抗菌凝膠、膏狀抗菌產(chǎn)品等對微生物抗菌效果的鑒定。
5.2.2.2試劑、培養(yǎng)基及器材
中和劑（PBS配制），其它見5.1.2.2。
5.2.2.3染菌載體制備
取試驗菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5×106CFU/mL～5×107CFU/mL制成菌懸液備用。用微量移液器滴染10μl菌懸液于滅菌載體上，36℃±1℃烘干或室溫晾干備用。
5.2.2.4中和劑鑒定試驗
5.2.2.4.1試驗分組
第1組：5.0mL中和劑+染菌載體→培養(yǎng)
第2組：（含抗菌劑的載體+5.0mL中和劑）+染菌載體→培養(yǎng)
第3組：5.0mL稀釋液+染菌載體→培養(yǎng)
第4組：稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基→培養(yǎng)
5.2.2.4.2試驗步驟
根據(jù)試驗分組，準備試管和平皿，依次進行編號。
第1組：取5.0mL中和劑于無菌平皿中，置20℃±1℃水浴5min，加入1片染菌載體，作用10min，取出菌片放入5.0mL中和劑試管內(nèi)，作用10min后，置渦旋振蕩器上振蕩1min或在手掌上用力振打80次，將試驗菌洗下，用中和劑做10倍系列稀釋后，選擇適宜稀釋度，分別吸取1.0mL接種于2個平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。
第2組：取5.0mL中和劑于無菌平皿內(nèi)，加入1片沾有抗菌樣本的載體，混勻，置20℃±1℃水浴作用10min制成中和產(chǎn)物。再用無菌鑷子取1片染菌載體，浸于中和產(chǎn)物中作用10min后，用無菌鑷子取出染菌載體移入含5.0mL中和產(chǎn)物試管中，作用10min，振蕩，將試驗菌洗下，用中和產(chǎn)物做10倍系列稀釋,選適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。
第3組：取5.0mLPBS于無菌平皿中，置20℃±1℃水浴5min，加入1片染菌載體，作用10min，取出菌片放入5.0mLPBS試管內(nèi)，作用10min后，振蕩，將試驗菌洗下，用PBS做10倍系列稀釋,選適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。
第4組：分別吸取稀釋液（PBS）與中和劑各1.0mL于同一無菌平皿內(nèi)，倒入同批次的培養(yǎng)基15～20mL，培養(yǎng)觀察。
5.2.2.4.3結(jié)果判定
第1、2和3組有相似量試驗菌生長，且菌量在1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。計算組間菌落數(shù)誤差率，其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過15%。第4組無菌生長,否則，說明試劑有污染，應(yīng)更換無污染的試劑重新進行試驗。試驗重復3次，每次試驗均應(yīng)符合以上要求。
5.2.2.5試驗步驟
按5g/片的量稱取抗菌樣品于無菌平皿內(nèi)，置20℃±1℃水浴5min，用無菌鑷子取染菌載體，使載體完全浸沒于抗菌樣品中，立即計時。
待染菌載體與抗菌劑相互作用至各預定時間（以說明書規(guī)定時間為T，時間分別為0.5T，T，1.5T），分別取染菌載體加入5.0mL中和劑試管中，混勻。
經(jīng)中和劑作用10min后，振蕩，將試驗菌洗下，分別吸取1.0mL樣液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時，可用PBS進行系列10倍稀釋后，再進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。
取與試驗樣品同質(zhì)材料不含抗菌成分的對照樣品代替抗菌樣品浸泡2片染菌載體，進行平行試驗，作為陽性對照。陽性對照回收菌量為1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。取同批次稀釋液、中和劑、培養(yǎng)基作陰性對照。
所有試驗樣本和對照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng)，細菌繁殖體培養(yǎng)48h觀察結(jié)果；白色念珠菌培養(yǎng)72h觀察結(jié)果。試驗重復3次，計算殺菌率。
5.2.2.6結(jié)果判定
說明書規(guī)定時間的殺菌率≥90%，判有抗菌作用；說明書規(guī)定時間的殺菌率≥99%，判有較強抗菌作用。
5.2.3載體殺菌試驗
5.2.3.1適用范圍
適用于添加有殺菌劑的衛(wèi)生濕巾或可溶性抗菌物質(zhì)的載體類產(chǎn)品的抗菌性能效果的鑒定。
5.2.3.2試劑、培養(yǎng)基及器材
中和劑（PBS配制），其它見5.1.1.2
5.2.3.3菌懸液配制及樣片制備
取試驗菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至1.0×105CFU/mL～9.0×105CFU/mL，制成菌懸液備用。
用無菌剪刀將抗菌產(chǎn)品和材質(zhì)相同但不含抗菌成分的對照樣品分別剪成20mm×30mm樣片備用。試驗時滴加0.1mL菌懸液。對照樣片染菌前需經(jīng)121℃15min滅菌處理。
5.2.3.4中和劑鑒定試驗
5.2.3.4.1試驗分組
第1組：5.0mL中和劑+染菌對照樣片→培養(yǎng)
第2組：（5.0mL中和劑+抗菌樣片）+染菌對照樣片→培養(yǎng)
第3組：5.0mL稀釋液+染菌對照樣片→培養(yǎng)
第4組：稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基→培養(yǎng)
5.2.3.4.2試驗步驟
根據(jù)試驗分組，準備試管和平皿，依次進行編號。
第1組：取5.0mL中和劑于無菌試管內(nèi)，置20℃±1℃水浴5min，用無菌鑷子取1片染菌對照樣片加入試管內(nèi)，作用10min，振蕩將試驗菌洗下，用中和劑做10倍系列稀釋后選擇適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。
第2組：取5.0mL中和劑于無菌試管內(nèi)，用無菌鑷子取1片抗菌樣片加入試管內(nèi)，振蕩混勻置20℃±1℃水浴作用10min制成中和產(chǎn)物，再夾入1片染菌對照樣片，作用10min，振蕩將試驗菌洗下，用中和產(chǎn)物做10倍系列稀釋，選擇適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種2個平皿，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。
第3組：取5.0mLPBS于無菌試管內(nèi)，置20℃±1℃水浴5min，用無菌鑷子取1片染菌對照樣片加入試管內(nèi)，作用10min，振蕩將試驗菌洗下，用PBS做10倍系列稀釋后選擇適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種2個平皿，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。
第4組：分別吸取稀釋液與中和劑各1.0mL于同一無菌平皿內(nèi)，傾注同批次的培養(yǎng)基15mL～20mL，培養(yǎng)觀察。
5.2.3.4.3結(jié)果判定
第1、2和3組有相似量試驗菌生長，且菌量在1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。計算組間菌落數(shù)誤差率，其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過15%。第4組無菌生長，否則，說明試劑有污染，應(yīng)更換無污染的試劑重新進行試驗。
試驗重復3次，每次試驗均應(yīng)符合以上要求。
5.2.3.5試驗步驟
取無菌平皿，用無菌鑷子取3片試驗樣片，勿重疊，置20℃±1℃水浴5min，在每一樣片上滴加0.1mL試驗用菌懸液，立即計時。
待試驗菌與樣片相互作用至各預定時間（以說明書規(guī)定時間為T，時間分別為0.5T，T，1.5T），分別夾取染菌樣片加于5.0mL中和劑試管中，混勻。
經(jīng)中和劑作用10min后，振蕩將試驗菌洗下，分別吸取1.0mL樣液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時，可10倍系列稀釋后，再進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。
同時用不含殺菌成分，其他成分相同的對照樣片2片代替試驗樣片，進行平行試驗，作為陽性對照。陽性對照回收菌落數(shù)在1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。取試驗同批次稀釋液、中和劑、培養(yǎng)基作陰性對照。
所有試驗樣本和對照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng)，細菌繁殖體培養(yǎng)48h、白色念珠菌需培養(yǎng)72h觀察最終結(jié)果。試驗重復3次，計算殺菌率。
5.2.3.6殺菌率計算
見5.2.2.6。
5.2.3.7結(jié)果判定
說明書規(guī)定時間的殺菌率≥90%，判有抗菌作用；說明書規(guī)定時間的殺菌率≥99%，判有較強抗菌作用。

5.2.4浸漬殺菌試驗
5.2.4.1適用范圍
適用于抗菌毛巾、抗菌棉襪、抗菌棉布、抗菌紗布口罩等含有溶出性抗菌材料的抗菌織物對微生物抗菌效果的試驗。
5.2.4.2試劑、培養(yǎng)基及器材
中和劑（PBS配制，針對樣品中所含可溶性抗菌成分進行中和劑鑒定試驗），其它見5.1.5.2
5.2.4.3試驗步驟
分別取1mL菌懸液加入2份準備好的錐形瓶內(nèi)試樣和1份對照織物上，確保其均勻分布，且錐形瓶中不留多余液，封好瓶口，以防蒸發(fā)，造成細菌死亡。
分別在一個盛有已接種菌懸液的試樣和對照織物的錐形瓶中加入100mL中和劑，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細菌，取1.0mL做10倍系列稀釋，選適當稀釋度以傾注法接種平皿，作為“0”接觸時間樣本和對照織物上的細菌數(shù)。
將另一個裝有已接種菌懸液試樣的錐形瓶于36℃±1℃培養(yǎng)20h±2h，加入100mL中和劑，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細菌，取1.0mL做10倍系列稀釋，選適當稀釋度以傾注法接種平皿，作為試驗組。
陰性對照組：試樣不接種菌懸液，在“0”接觸時間加入100mL中和劑，置渦旋振蕩器上振蕩1min取樣，接種平皿。
陽性對照組：另取1個裝有對照織物的錐形燒瓶，接種1mL菌懸液后，在36℃±1℃培養(yǎng)20h±2h，加入100mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩1.0min洗滌細菌，取1.0mL做10倍系列稀釋，選適當稀釋度以傾注法接種平皿。
將陰性和陽性對照樣本與試驗組樣本一并放36℃±1℃培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)。試驗重復3次。
5.2.4.4結(jié)果判定
“0”接觸時間對照織物的平均菌落數(shù)應(yīng)在1.0×103CFU/mL～5.0×103CFU/mL。
陰性對照應(yīng)無菌生長，陽性對照菌數(shù)比0接觸時間的菌數(shù)明顯增加。
各次試驗的殺菌率均≥90%，即可認定該樣品具有抗菌作用；殺菌率≥99%，判有較強抗菌作用。

5.2.5振蕩燒瓶試驗
5.2.5.1適用范圍
適用于添加有非溶出性抗菌物質(zhì)的抗菌產(chǎn)品對微生物抗菌效果的鑒定。
注1：在進行振蕩燒瓶試驗前，需要鑒定其抗菌成分是否可溶出，如果有溶出性抗菌材料，參照可溶出抗菌材料檢測，無溶出性抗菌材料，可選用振蕩燒瓶法進行。
注2：非溶出性抗菌材料的鑒定：將樣品置于無菌蒸餾水浸泡24h，取浸泡液參照5.1.1檢驗是否有抑菌效果，或?qū)悠凡贸芍睆?mm圓片參照5.1.4檢驗是否有抑菌環(huán)。如果無抑菌效果，說明樣品屬非溶出性抗菌材料，進行振蕩燒瓶試驗。
5.2.5.2試劑、培養(yǎng)基及器材
搖床，天平，其它見5.1.1.2
5.2.5.3試驗步驟
5.2.5.3.1對于抗菌無紡布口罩、衛(wèi)生巾、衛(wèi)生護墊、尿布、尿不濕、無紡布一次性內(nèi)褲等產(chǎn)品，對微生物抑菌效果的試驗方法參照GB15979進行。
結(jié)果判定：不加樣片組的菌落數(shù)在1.0×104CFU/mL～9.0×104CFU/mL，且樣品振蕩前后平均菌落數(shù)差值在10%以內(nèi)，試驗有效；被試樣片組抑菌率與對照樣片組抑菌率的差值≥26%，判產(chǎn)品具有抗菌作用。
5.2.5.3.2對于抗菌毛巾、抗菌棉襪、抗菌棉布、抗菌紗布口罩等含非溶出性抗菌材料的針織類抗菌織物對微生物抗菌效果按照FZ/T73023標準進行檢測和評價。

5.2.6貼膜試驗
5.2.6.1適用范圍
適用于PE抗菌底模、PE打孔膜及PE抗菌包裝袋、抗菌塑料、抗菌地板、抗菌瓷磚等產(chǎn)品抗菌效果測定。通過將細菌污染于樣品表面，然后用塑料薄膜覆蓋，使細菌與樣品表面充分接觸，以測定其抗菌效果。
5.2.6.2試劑、培養(yǎng)基及試驗器材
5.2.6.2.1試驗菌株
金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、大腸桿菌（8099）、白色念珠菌（ATCC10231），也可根據(jù)抗菌用品特定用途選用其他菌株。
5.2.6.2.2試劑
pH7.2～7.4的0.03mol/LPBS，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，沙氏瓊脂培養(yǎng)基，沙氏液體培養(yǎng)基。
5.2.6.2.3試驗器材
薄膜為不影響細菌生長和不吸水的材料，厚度不規(guī)定，使用面應(yīng)有較好的粘合性，邊長為40mm±2mm的正方形；無菌塑料袋、樣片：將試樣及對照試樣（與試樣同質(zhì)不含抗菌組分）分別制成邊長為50mm±2mm的正方形，其中抗菌樣片3個，對照樣片6個。
5.2.6.3實驗步驟
將試驗菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下制成菌懸液。將菌懸液用1/500的營養(yǎng)肉湯稀釋成2.5×105CFU/mL～1.0×106CFU/mL試驗用菌懸液。
將樣片試驗面朝上放于無菌平皿中，取0.4mL菌懸液滴染于樣片中央，涂勻。薄膜覆蓋，小心觸壓薄膜，使菌液均勻散開，以免菌液溢出薄膜外。蓋上平皿蓋。同時取對照樣片放于無菌平皿中，取0.4mL菌懸液滴染于樣片中央，涂勻。按試驗樣片方法用薄膜覆蓋，蓋上平皿蓋。
將裝有接種過菌液的試驗樣片和對照樣片的平皿（3個抗菌樣片和3個對照樣片），置36℃±1℃、相對濕度不低于90%的條件下培養(yǎng)24h。
以無菌操作方式用鑷子將覆蓋膜和樣片放入無菌塑料袋中，然后加入10mL肉湯培養(yǎng)液，用手充分揉搓袋中的樣片和覆蓋薄膜，將細菌洗下。
吸取1mL洗下的菌液，取適當稀釋度接種2個平皿，加入15mL～20mL營養(yǎng)瓊脂，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿使底向上，置36℃±1℃培養(yǎng)48h。
將另3個對照樣片“0”時間接種菌液后，立即用鑷子將覆蓋膜和樣片放入塑料袋中，洗脫和接種方法與試驗樣片相同；以試驗用同批次稀釋液接種培養(yǎng)基作為陰性對照，試驗重復3次。
5.2.6.4結(jié)果的計算與判定
5.2.6.5.1試驗成立條件
各次試驗陰性對照均無菌生長；對照樣片接種后直接求出活菌數(shù)的對數(shù)值應(yīng)：
式中：
L最大值—最大活菌數(shù)的對數(shù)值；
L最小值—最小活菌數(shù)的對數(shù)值；
L平均值—平均活菌數(shù)的對數(shù)值；
對照樣片“0”時間接種后的活菌數(shù)平均值不少于1.0×105CFU/樣片；覆蓋了薄膜的對照樣片培養(yǎng)24h后的活菌數(shù)不少于1.0×104CFU/樣片。
5.2.6.5.2結(jié)果判定
各次試驗抗菌活性值均≥1.0，可判定該試樣具有抗菌作用；各次試驗抗菌活性值均≥2.0，可判定該試樣具有較強抗菌作用。

5.2.7持續(xù)抗菌試驗
5.2.7.1適用范圍
適用于具有長效抗菌作用產(chǎn)品抗菌效果的鑒定。
5.2.7.2試劑、培養(yǎng)基及器材
試驗菌株：金黃色葡萄球菌(ATCC6538)、大腸桿菌(8099)、黑曲霉菌(ATCC16404)等
載體：布片、玻片、不銹鋼片等
試劑：稀釋液（含0.01%吐溫80的0.03mol/L的PBS）、中和劑（PBS配制）、營養(yǎng)瓊脂、麥芽浸膏瓊脂等。
5.2.7.3試驗步驟
5.2.7.3.1長效抗菌劑樣片的制備：
根據(jù)長效抗菌劑所用載體，如木板、金屬板、塑料板等裁成50mm×50mm，制備抗菌樣片。按照抗菌劑涂抹要求，將抗菌劑涂布于樣片表面，室溫干燥備用，作為實驗組；未經(jīng)任何處理的樣片（經(jīng)壓力蒸汽滅菌處理）作為對照組；兩組樣片在室溫下存放于實驗室。
5.2.7.3.2中和劑鑒定試驗
以長效抗菌劑進行中和劑鑒定試驗，方法見5.2.1.4。
5.2.7.3.3長效抗菌實驗步驟
實驗室試驗：兩組樣片于室溫存放至長效抗菌劑說明書規(guī)定的持續(xù)作用時間（如7d，15d和30d等），后，取出實驗組和對照組進行試驗。將24h新鮮培養(yǎng)的菌懸液染到載體上，實驗組染菌載體作用至說明書規(guī)定時間后（如2.5min、5min、10min、20min等）投入中和劑中，混勻后稀釋接種；同時用對照組樣片染菌進行平行試驗，對照組染菌載體在相同時間投入稀釋液中，混勻后稀釋接種。細菌繁殖體36℃±1℃培養(yǎng)48h、黑曲霉菌30℃±1℃培養(yǎng)72h觀察最終結(jié)果，對照載體染菌后的回收菌量在1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。取試驗同批次稀釋液、中和劑、培養(yǎng)基作陰性對照。試驗重復3次，計算殺菌率。
現(xiàn)場實驗：選擇病房或其他公共場所表面作為試驗現(xiàn)場，選擇相似場所一組作為對照組，一組作為實驗組。對照組不做任何處理，試驗組噴涂抗菌劑，對照組以常規(guī)方式清潔消毒，實驗組噴涂抗菌劑后，日常僅清水擦拭，至規(guī)定時間（長效時間如7d，15d、30d）后進行采樣。對照組用無菌棉簽沾稀釋液采樣，實驗組用無菌棉簽沾中和劑采樣，采樣面積為50cm2，對照組和實驗組均為30個樣本。所有試驗樣本和對照樣本經(jīng)適當稀釋接種后，36℃±1℃培養(yǎng)48h觀察結(jié)果，計算殺菌率。
5.2.7.4結(jié)果判定
殺菌率≥90%，判在該段時間內(nèi)具有持續(xù)抗菌作用。

以上內(nèi)容為WST 650-2019抗菌和抑菌效果評價方法政策文件的全部內(nèi)容，此政策實施日期，相關(guān)企業(yè)需要根據(jù)要求做好抗抑菌劑產(chǎn)品備案檢測，健明迪檢測，專注消毒產(chǎn)品備案，提供CMA資質(zhì)認證檢驗報告。

5.1抑菌效果
5.1.1懸液定量抑菌試驗
5.1.1.1適用范圍
適用于液體抑菌制劑如衛(wèi)生洗液、抑菌噴霧劑等對微生物抑菌效果的測定。
5.1.1.2試劑、培養(yǎng)基及器材
5.1.1.2.1試驗菌株
金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、大腸桿菌（8099）、白色念珠菌（ATCC10231）及根據(jù)抑菌劑特定用途所用的其他菌株。
5.1.1.2.2試劑
稀釋液：0.03mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS）（pH7.2～7.4），培養(yǎng)基：金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的培養(yǎng)使用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，白色念珠菌的培養(yǎng)使用沙氏瓊脂培養(yǎng)基。
5.1.1.2.3器材
恒溫水浴箱、計時器、Ⅱ級生物安全柜等。
5.1.1.3試驗步驟
取試驗菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5.0×105CFU/mL～4.5×106CFU/mL菌懸液備用。取無菌試管，先加入5.0mL樣品（根據(jù)使用說明書要求使用原液或稀釋液），置20℃±1℃水浴中5min后，再加入0.1mL試驗用菌懸液，迅速混勻并立即計時。待試驗菌與樣品相互作用至說明書的規(guī)定時間，分別吸取1.0mL試驗菌與樣品混合液接種2個平皿，傾注培養(yǎng)基。菌量無法計數(shù)時，以PBS做10倍系列稀釋，選適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種2個平皿，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。同時用PBS代替樣品，進行平行試驗，作為陽性對照。陽性對照回收菌落數(shù)在1.0×104CFU/mL～9.0×104CFU/mL之間。取同批次PBS、培養(yǎng)基作陰性對照。所有試驗樣本和對照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng)，細菌繁殖體培養(yǎng)48h觀察最終結(jié)果；白色念珠菌培養(yǎng)72h觀察最終結(jié)果。試驗重復3次，計算抑菌率。
5.1.1.4結(jié)果判定
抑菌率≥50%～90%，判有抑菌作用；抑菌率≥90%，判有較強抑菌作用。

5.1.2載體浸泡定量抑菌試驗
5.1.2.1適用范圍
適用于膏體或半固體凝膠類、黏稠狀抑菌產(chǎn)品對微生物抑菌效果的測定。
5.1.2.2試劑、培養(yǎng)基及器材
載體為10mm×10mm脫脂白平紋布片，脫脂方法依照《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002版）進行，使用前壓力蒸汽滅菌備用，電子天平（d=0.01g），其它同5.1.1.2。
5.1.2.3操作步驟
取試驗菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5.0×106CFU/mL～5.0×107CFU/mL制成菌懸液備用。用微量移液器滴染10μl菌懸液于滅菌載體上，36℃±1℃烘干或室溫晾干備用。
按5g/片的量稱取樣品于無菌平皿內(nèi)，置20℃±1℃水浴5min，用無菌鑷子取染菌載體，使載體完全浸沒于樣品中，立即計時。待染菌載體與樣品相互作用至說明書的規(guī)定時間，分別取染菌載體加入5.0mLPBS試管中，混勻，振蕩，將試驗菌洗下，分別吸取1.0mL樣液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時，可用PBS進行10倍系列稀釋后，再進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。取10.0g與試驗樣品同質(zhì)材料不含抑菌成分的對照樣品浸泡2片染菌載體進行平行試驗，作為陽性對照。陽性對照回收菌量為1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。取同批次PBS、培養(yǎng)基作陰性對照。所有試驗樣本和對照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng)，細菌繁殖體培養(yǎng)48h觀察結(jié)果；白色念珠菌培養(yǎng)72h觀察結(jié)果。試驗重復3次，計算抑菌率。
5.1.2.4結(jié)果判定
抑菌率≥50%～90%，判有抑菌作用；抑菌率≥90%，判有較強抑菌作用。

5.1.3載體抑菌試驗
5.1.3.1適用范圍
適用于含溶出性抑菌成分的濕巾、無紡布口罩、衛(wèi)生巾、護墊、尿布等固體類抑菌產(chǎn)品對微生物抑菌效果的測定。
5.1.3.2試劑、培養(yǎng)基及器材
見5.1.1.2。
5.1.3.3試驗步驟
取試驗菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至約105CFU/mL～106CFU/mL，制成菌懸液備用。用滅菌剪刀在無菌條件下將試驗樣品和對照樣品分別剪成20mm×30mm樣片備用。試驗時滴加0.1mL菌懸液。對照樣片染菌前需經(jīng)壓力蒸汽滅菌。取無菌平皿，用無菌鑷子取2片試驗樣片，勿重疊，置20℃±1℃水浴5min，在每一樣片上滴加0.1mL試驗用菌懸液，立即計時。待試驗菌與樣片接觸作用至說明書的規(guī)定時間，分別夾取染菌樣片加于5.0mLPBS試管中，混勻。振蕩洗脫，分別吸取1.0mL樣液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時，可10倍系列稀釋后，再進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。同時用與試驗樣品同質(zhì)材料不含抑菌成分的對照樣片2片代替試驗樣片進行試驗，作為陽性對照，陽性對照回收菌量為1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片；取同批次PBS、培養(yǎng)基作陰性對照。
所有試驗樣本和對照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng)，細菌繁殖體培養(yǎng)48h、白色念珠菌培養(yǎng)72h觀察最終結(jié)果。試驗重復3次，計算抑菌率。
5.1.3.4抑菌率計算
見式（2）。
5.1.3.5結(jié)果判定
抑菌率≥50%～90%，判有抑菌作用；抑菌率≥90%，判有較強抑菌作用。

5.1.4抑菌環(huán)試驗
5.1.4.1適用范圍
適用于含溶出性抑菌物質(zhì)，可制成直徑為5mm片狀物的固體抑菌產(chǎn)品的抑菌效果鑒定；也可用于鑒別抗抑菌樣品中是否含有可溶性抑菌物質(zhì)。
5.1.4.2試劑、培養(yǎng)基及器材
游標卡尺，其它見5.1.1.2
5.1.4.3試驗步驟
將試驗菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，稀釋至5.0×105CFU/mL～5.0×106CFU/mL備用。
抑菌片的制備：溶出性固體抑菌產(chǎn)品，直接制成直徑為5mm，厚度不超過4mm圓片（塊），每4片為一組。陰性對照樣片的制備：取同種材質(zhì)不含抑菌成分的樣本，制成與試驗組大小相同的圓片（塊）。
用無菌棉拭子蘸取濃度為5.0×105CFU/mL～5.0×106CFU/mL試驗菌懸液，在適宜的培養(yǎng)基平板表面均勻涂抹3次。每涂抹1次，平板應(yīng)轉(zhuǎn)動60°，最后將棉拭子繞平板邊緣涂抹一周。蓋好平皿，置室溫干燥5min。
每次試驗貼放1個染菌平板，每個平板貼放4片試驗樣片，1片陰性對照樣片，共5片。用無菌鑷子取樣片貼放于平板表面，陰性對照樣片貼于平板中心位置，試驗樣片貼于四周，貼放好后，用無菌鑷子輕壓樣片，使其緊貼于平板表面。各樣片中心之間相距25mm以上，與平板的周緣相距15mm以上。蓋好平板，置36℃±1℃培養(yǎng)16h～18h觀察結(jié)果，試驗重復3次。
用游標卡尺測量抑菌環(huán)的直徑（包括貼片）并記錄，測量抑菌環(huán)時，應(yīng)選均勻而完全無菌生長的抑菌環(huán)進行，測量其直徑應(yīng)以抑菌環(huán)外沿為界。
5.1.4.4結(jié)果判定
陰性對照樣片應(yīng)無抑菌環(huán)產(chǎn)生，試驗樣品抑菌環(huán)直徑＞7mm者，判為有抑菌作用；抑菌環(huán)直徑≤7mm者，判為無抑菌作用。
3次重復試驗（共12個樣片）均有抑菌作用，則判為合格。

5.1.5浸漬抑菌試驗
5.1.5.1適用范圍
適用于溶出性抑菌織物（如抑菌毛巾、口罩、內(nèi)衣等）抑菌效果的測定。
5.1.5.2試劑、培養(yǎng)基及器材
5.1.5.2.1試驗菌株見5.1.1.2.1
5.1.5.2.2試樣
在距試樣布邊10cm以上、離布端1m以上部位，剪取直徑為5cm的圓形試樣若干，取3份試樣分別裝于3個錐形瓶中，蓋好瓶口備用（需用試樣數(shù)量要根據(jù)纖維類別及織物織法而定，以能吸收1mL菌液且錐形瓶中不留殘液為度）。另同法剪取與試樣相同材質(zhì)但不含抑菌劑對照織物若干，取2份分別裝于2個錐形瓶中，蓋好瓶口，121℃滅菌15min備用。
5.1.5.2.3試劑和培養(yǎng)基
0.03mol/LPBS（pH7.2～7.4），肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、沙氏培養(yǎng)基。
5.1.5.2.4菌懸液的制備
用接種環(huán)將保存的菌種以劃線法接種到營養(yǎng)瓊脂平板，36℃±1℃培養(yǎng)24h，取典型的菌落移種到含肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中，36℃±1℃培養(yǎng)24h，用肉湯對培養(yǎng)液進行系列稀釋，使菌懸液的含菌量為1.0×105CFU/mL～5.0×105CFU/mL。
5.1.5.3試驗步驟
分別取1mL菌懸液加入2份準備好的錐形瓶內(nèi)試樣和1份對照織物上，確保其均勻分布，且錐形瓶中不留多余液，封好瓶口，以防蒸發(fā)造成細菌死亡。分別在一個盛有已接種菌懸液的試樣和對照織物的錐形瓶中加入100mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細菌，分別吸取1.0mL樣液或10倍系列稀釋液接種2個平皿，作為“0”接觸時間樣本和對照織物上的細菌數(shù)。
將另一個裝有已接種菌懸液試樣的錐形瓶于36℃±1℃培養(yǎng)20h±2h，加入100mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細菌，分別吸取1.0mL樣液或10倍系列稀釋液接種2個平皿，作為試驗組。
陰性對照組，試樣不接種菌懸液，在“0”接觸時間加入100mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩1min取樣，接種平皿。
陽性對照組，另取1個裝有對照織物的錐形燒瓶，接種1mL菌懸液后，在36℃±1℃培養(yǎng)20h±2h，加入100mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細菌，分別吸取1.0mL樣液或10倍系列稀釋液接種2個平皿。將陰性和陽性對照樣本與試驗組樣本一并放36℃±1℃培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)，試驗重復3次。
5.1.5.4結(jié)果判定
試驗成立條件要求：“0”接觸時間對照織物的平均回收菌量為1×103CFU/mL～5×103CFU/mL；陰性對照應(yīng)無菌生長，陽性對照菌數(shù)比0接觸時間的菌數(shù)明顯增加。
各次試驗的抑菌率均≥50%，即可判定該樣片具有抑菌作用。

5.1.6滯留抑菌效果試驗
5.1.6.1適用范圍
適用于有持續(xù)抑菌作用的抑菌洗液類抑菌產(chǎn)品的滯留抑菌效果鑒定。
5.1.6.2試劑、培養(yǎng)基及試驗器材
試驗菌株：金黃色葡萄球菌（ATCC27217）
試驗產(chǎn)品:試驗品為25套按順序編號的樣品。每套2瓶，一瓶為測試樣品，另一瓶為不含抗（抑）菌劑的對照樣品。
不含抑菌劑的用品25瓶（試驗調(diào)整階段用）。
胰蛋白酶大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）、胰蛋白酶大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）、羊血、經(jīng)脫纖維處理、0.075mol/L的磷酸鹽緩沖液、70%酒精、金屬筒（直徑2.2cm、高度3cm）、一次性接種環(huán)（直徑4mm）、小塑料碗（直徑2.2cm，高2.5mm,）、膠帶（Darapore,3M公司生產(chǎn)）、尼龍刮菌棒、聚乙二醇單辛基苯基醚(曲拉通X-100；Triton-X100)500mL、外用抗生素軟膏、玻璃彎棒、皮膚消毒劑等。
5.1.6.3試驗步驟
5.1.6.3.1調(diào)整階段
試驗開始前7d至14d，受試者使用不含抗（抑）菌成分的香皂、洗發(fā)水和沐浴液進行日常的洗手、洗澡，此階段持續(xù)至少7d，但不超過14d。
5.1.6.3.2清洗階段
清洗階段共3d，受試者每天用有持續(xù)抑菌作用的抑菌洗液類樣品清洗一側(cè)前臂,用對照樣品清洗另一側(cè)前臂，清洗過程如下:
先清洗左臂，用水溫為35℃～37℃的流動水潤濕前臂內(nèi)側(cè)；取樣液3mL于手心中；從手腕至臂肘上下涂擦60s；用流動的清水沖洗前臂15s,不要搓擦；用紙巾沾干前臂，不要搓擦；用不含抑菌成分的對照樣品重復以上步驟清洗右臂；按上面所描述的試驗步驟每日清洗前臂3次，每次間隔至少1h，在最后一次清洗之后，需記錄好時間，在12h之后,進行滯留效果檢測。在第9次清洗前臂以后，受試者不能洗澡、淋浴或洗凈前臂，直到試驗結(jié)束。
5.1.6.3.3試驗階段
最后一次清洗后的12h或24h，將在受試者每只前臂上劃出一個試驗區(qū)，對試驗區(qū)進行接種、封包和回收存活細菌,具體步驟如下:
將金黃色葡萄球菌（ATCC27217）連續(xù)轉(zhuǎn)種3代，取第3代培養(yǎng)物接種于胰蛋白大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）中，在36℃±1℃的條件下培養(yǎng)20h±2h。然后用TSB適當稀釋菌懸液，使菌懸液濃度約為108CFU/mL～109CFU/mL。
接種:在受試者的每只前臂中間部位（不要在手腕和肘皺褶處），用帶有印墨直徑為3.00cm的玻璃量筒扣在皮膚上，劃分出一個試驗區(qū)。使用加樣器取10μL上述菌懸液，接種于前臂試驗區(qū)（菌落數(shù)為106CFU/試驗區(qū)～107CFU/試驗區(qū)），用一次性接種環(huán)，把接種物涂成一圓形，使其與試驗區(qū)邊緣應(yīng)有4mm～5mm的距離。
封包:細菌接種后立即用小塑料碗扣于染菌區(qū)上面，再用膠帶將小塑料碗固定在皮膚上，記錄封包的時間。
回收存活細菌:接種后2h±5min對前臂上接種的區(qū)域進行取樣。將金屬筒放置于試驗區(qū)中間部位，不要接觸到蓋有印墨的邊緣。將1mL含0.1%Triton-X100的0.075mol/L磷酸鹽緩沖液吸移至金屬筒內(nèi)，用尼龍刮菌棒刮洗金屬筒罩住區(qū)域內(nèi)的皮膚60s,將筒內(nèi)液體吸移至試管內(nèi)，再加1mL含0.1%TritonX-100的0.075mol/L磷酸鹽緩沖液，對該區(qū)域內(nèi)的皮膚進行第二次刮洗30s，將第二次擦洗的液體，注入含第一次刮洗液體的試管中。
實驗區(qū)試驗后的消毒處理:對抑菌樣品組清洗后的實驗區(qū)采樣之后，需用70%的酒精對實驗區(qū)進行消毒。然后對無抑菌成分的對照組清洗后的實驗區(qū)以同樣方法進行采樣、消毒。實驗結(jié)束后，用皮膚消毒劑對兩只前臂進行消毒處理，處理后清水沖洗，擦干，再涂少量的抗生素軟膏。
接種與培養(yǎng):對每一個取樣進行接種，以0.0375mol/L磷酸鹽緩沖液對樣品進行10倍系列稀釋，選適當稀釋度取0.1mL接種于2個含5%羊血的TSA平板表面，用玻璃彎棒涂勻，在36℃±1℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h±4h,計數(shù)菌落數(shù)。
以試驗同批次的稀釋液、培養(yǎng)基等分別設(shè)陰性對照。
5.1.6.4判定標準
各次試驗陰性對照菌無菌生長。實驗不得少于16人次，抑菌率均≥50%，可判定該產(chǎn)品在規(guī)定的時間內(nèi)有滯留抑菌作用。

5、評價方法
4、評價方法的選擇原則
4.1抗菌試驗與抑菌試驗區(qū)別
抗菌試驗：測定抗菌產(chǎn)品對細菌和真菌的抗菌作用，試驗過程中需要用中和劑終止殺菌作用。
抑菌試驗：測定抑菌產(chǎn)品對細菌和真菌的抑菌作用，試驗過程中不需要使用中和劑終止抑菌作用。
4.2根據(jù)產(chǎn)品性能選擇合適的評價方法
4.2.1抑菌效果評價方法的選擇原則
抑菌類產(chǎn)品選擇抑菌效果評價方法。液體抑菌產(chǎn)品選擇懸液定量抑菌試驗，膏體或半固體凝膠類、黏稠狀抑菌產(chǎn)品選擇載體浸泡定量抑菌試驗，濕巾類或其他自身含有抑菌成分的產(chǎn)品選擇載體抑菌試驗，肥皂類固體抑菌產(chǎn)品選擇抑菌環(huán)試驗，含有可溶性抑菌成分的紡織品選擇浸漬抑菌試驗，含有持續(xù)抑菌作用的抑菌洗液選擇滯留抑菌試驗。
4.2.2抗菌效果評價方法的選擇原則
抗菌類產(chǎn)品選擇抗菌效果評價方法。液體抗菌產(chǎn)品選擇懸液定量殺菌試驗，凝膠狀或膏狀抗菌產(chǎn)品選擇載體浸泡定量殺菌試驗，濕巾類或其他自身含有抗菌成分的產(chǎn)品選擇載體殺菌試驗，含有可溶性抗菌成分的紡織品選擇浸漬抗菌試驗。
含有不可溶抗菌成分的紡織品、無紡布、纖維等，經(jīng)鑒別不含可溶性抗抑菌成分后，采用燒瓶振蕩試驗。
含有不可溶抗菌成分的瓷磚、塑料、金屬、涂料等，采用貼膜試驗；對于涂于表面，干燥后具有持續(xù)抗菌作用的產(chǎn)品，進行持續(xù)抗菌試驗。

3、術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本文件。
3.1抗菌
采用化學或物理方法殺滅或妨礙細菌生長繁殖，可減少其數(shù)量以及活性的過程。
3.2抑菌
采用化學或物理方法抑制或妨礙細菌生長繁殖及其活性的過程。
3.3持續(xù)抗菌作用
具有抗菌作用的消毒產(chǎn)品涂于物體表面，持續(xù)7d以上仍具有殺滅或妨礙細菌生長繁殖作用。
3.4中和劑
在殺滅微生物試驗中，用以消除試驗微生物與消毒劑的混懸液中，以及微生物表面上殘留的消毒劑，使其失去對微生物抑制和殺滅作用的試劑。

2、規(guī)范性引用文件
下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
GB15979一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準
FZ/T73023抗菌針織品
消毒技術(shù)規(guī)范（2002版）衛(wèi)生部（衛(wèi)法監(jiān)發(fā)〔2002〕282號）

1、范圍
本標準規(guī)定了抗菌和抑菌評價方法的選擇原則和使用。
本標準適用于具有抗菌和(或)抑菌功能產(chǎn)品的抗菌、抑菌效果的鑒定。

抗抑菌產(chǎn)品檢測新標準WST650-2019抗菌和抑菌效果評價方法于2019年7月1日起實施，健明迪檢測，準確把握消毒政策要求變化，提供抗抑菌劑等消毒產(chǎn)品產(chǎn)品檢測備案，具備CNAS與CMA雙資質(zhì)認可，專業(yè)權(quán)威第三方檢測機構(gòu)。下面為抗抑菌劑檢測備案新政策WST 650-2019簡要內(nèi)容。