流行病學(xué)數(shù)據(jù)表明，HPV感染與5%人類癌癥有關(guān)?，F(xiàn)有HPV疫苗可有效預(yù)防大多數(shù)因乳頭瘤狀病毒感染而引起的癌癥，但目前尚無(wú)針對(duì)HPV感染后引起惡性癌癥的治療方法，因此發(fā)展有效抗HPV治療方法仍是重要的醫(yī)學(xué)挑戰(zhàn)。由于乳頭瘤病毒感染具有宿主特異性，HPV只感染人，尚不能自然感染其它動(dòng)物，這就限制了HPV感染動(dòng)物模型發(fā)展及發(fā)病機(jī)制研究。研究人員通過犬口腔乳頭瘤病毒（Canine oral papillomavirus，COPV）、牛乳頭瘤病毒（Bovine papillomavirus，BPV）及棉尾兔乳頭瘤病毒等進(jìn)行了乳頭瘤病毒引起的癌癥致病機(jī)制研究及疫苗研發(fā)。雖然這些模型已經(jīng)幫助我們了解這類致癌病毒的感染過程、生命周期和發(fā)病機(jī)制以及在疫苗評(píng)價(jià)方面做出了重要貢獻(xiàn)，但由于這些動(dòng)物體積較大并且其生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)于人類不同以及試劑的有限性等原因限制了對(duì)HPV更進(jìn)一步的研究。2011年印度科學(xué)家發(fā)現(xiàn)的鼠乳頭狀病毒可感染實(shí)驗(yàn)室小鼠品系，首次提供在小鼠上研究乳頭瘤狀病毒的機(jī)會(huì)。

本研究中，NU/NU小鼠尾部感染MmuPV116周后可肉眼觀察到明顯乳頭瘤狀病變，增生組織均能檢測(cè)到MmuPV1 DNA。尾部組織病理HE染色觀察可見感染的小鼠尾部鱗狀上皮增生；RNAscope技術(shù)是在RNA水平利用靶向特異性雙Z設(shè)計(jì)探針檢測(cè)單鏈RNA的原位雜交，解決了尚無(wú)MmuPV1相應(yīng)抗體檢測(cè)及定量的問題。本模型中，MmuPV1感染小鼠尾部皮膚可檢測(cè)到明顯E1^E4轉(zhuǎn)錄本信號(hào)。同時(shí)將MmuPV1感染增生尾部皮膚與未感染小鼠尾部進(jìn)行轉(zhuǎn)錄水平比較分析發(fā)現(xiàn)，差異基因主要與皮膚上發(fā)育、核糖體合成、嘌呤核苷酸代謝等生物進(jìn)程有關(guān)，并且富集到癌癥信號(hào)通路、核糖體合成相關(guān)信號(hào)通路等，說(shuō)明相關(guān)基因與信號(hào)通路可能直接或間接參與MmuPV1感染尾部皮膚后病變的發(fā)生。

綜上所述，MmuPV1感染NU/NU小鼠尾部皮膚增生模型的建立，為HPV感染、致病機(jī)制研究以及防治策略等方面提供更多機(jī)會(huì)。

人乳頭瘤病毒在《人間傳播的病原微生物名錄》中的危害程度屬于第三類。但由于該病毒不能感染動(dòng)物，科研人員使用小鼠乳頭瘤病毒建立動(dòng)物參比模型，用于人乳頭瘤病毒感染及致病機(jī)制研究。MmuPV1未被收錄《人間傳播的病原微生物名錄》中。MmuPV1和HPV同屬于乳多空病毒科乳頭瘤病毒屬，由于MmuPV1發(fā)現(xiàn)時(shí)間較短，對(duì)其研究較為有限，因此，其許多生物學(xué)信息可參考HPV的資料。

小鼠乳頭瘤病毒未被收錄《人間傳播的病原微生物名錄》中；但人乳頭瘤病毒在《人間傳播的病原微生物名錄》中的危害程度屬于第三類。為保證實(shí)驗(yàn)室生物安全，防止該病原對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的感染，本實(shí)驗(yàn)室按照生物安全三類病原進(jìn)行防范。根據(jù)《人間傳染的病原微生物名錄》中對(duì)不同類別病原微生物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)要求不同生物安全級(jí)別實(shí)驗(yàn)室的解釋，在實(shí)驗(yàn)操作涉及小鼠乳頭瘤病毒的大量培養(yǎng)、離心、凍干等實(shí)驗(yàn)操作以及小鼠乳頭瘤病毒感染的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)應(yīng)在BSL-2或ABSL-2實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。對(duì)于未經(jīng)小鼠乳頭瘤病毒培養(yǎng)的感染材料的操作應(yīng)在BSL-2實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。對(duì)經(jīng)有效方法滅活后不含小鼠乳頭瘤病毒活病毒材料或無(wú)感染性材料的實(shí)驗(yàn)操作可在BSL-1實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

1.NU/NU小鼠尾部感染MmuPV1觀察

肉眼觀察可見，感染后4周左右部分小鼠尾部皮膚即出現(xiàn)輕微增生，16周后可觀察到明顯病變（圖1）。

圖1 MmuPV1感染NU/NU小鼠尾部增生模型

2.NU/NU小鼠尾部感染MmuPV1 DNA檢測(cè)

MmuPV1感染尾部提取總DNA，利用對(duì)MmuPV1 E2基因特異性引物擴(kuò)增鑒定MmuPV1表達(dá)。結(jié)果表明， 9只感染MmuPV1的小鼠尾部均建立MmuPV1持續(xù)感染，并可檢測(cè)到MmuPV1 DNA（圖2）。

圖2感染小鼠尾部MmuPV1 E2基因PCR鑒定

1-9：MmuPV1感染小鼠尾部DNA；10：MmuPV1質(zhì)粒（陽(yáng)性對(duì)照）；

11：未感染小鼠尾部DNA（陰性對(duì)照）；12：水（空白對(duì)照）；

M：Trans 2k Plus DNA Marker

3.NU/NU小鼠尾部感染MmuPV1后的病理學(xué)變化

用MmuPV1感染NU/NU小鼠尾部，16周后出現(xiàn)明顯增生，收集增生部位用10%福爾馬林固定，蘇木精伊紅染色（HE染色）后進(jìn)行病理分析。組織學(xué)觀察可見感染的小鼠尾部表面鱗狀上皮增生（圖3）。因?yàn)镸muPV1 E1^E4轉(zhuǎn)錄本存在于大多數(shù)乳頭瘤病毒早期和晚期轉(zhuǎn)錄過程，即利用RNAscope原位雜交檢測(cè)MmuPV1 E1^E4轉(zhuǎn)錄本表達(dá)，發(fā)現(xiàn)尾部增生部位轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)為明顯陽(yáng)性（棕色）（圖4A），而陰性探針組未檢測(cè)到信號(hào)（圖4B）。

圖3MmuPV1感染小鼠尾部病變HE染色分析（100X）

圖4 RNAscope原位雜交檢測(cè)感染小鼠尾部病變MmuPV1 E1^E4轉(zhuǎn)錄本

A： RNAscope原位雜交E1^E4轉(zhuǎn)錄本檢測(cè)；B：RNAscope原位雜交陰性探針對(duì)照

4.NU/NU小鼠尾部感染MmuPV1轉(zhuǎn)錄水平差異表達(dá)分析

NU/NU小鼠尾部感染MmuPV1 16周后，尾部增生皮膚（實(shí)驗(yàn)組Tail）及尾部正常皮膚（空白對(duì)照組Tail C）差異基因表達(dá)分析。結(jié)果表明，與對(duì)照組比，實(shí)驗(yàn)組有2653個(gè)基因表達(dá)上調(diào)（紅色點(diǎn)），2306個(gè)基因表達(dá)下調(diào)（綠色點(diǎn)），藍(lán)色點(diǎn)表示未發(fā)生顯著變化的基因，其中橫坐標(biāo)表示基因表達(dá)的倍數(shù)變化（log2FoldChange），其中絕對(duì)值越大表明，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組表達(dá)變化倍數(shù)越大；縱坐標(biāo)表示表達(dá)差異的顯著水平，Y軸1.3附近虛線對(duì)于Pvalue＝0.05（圖5A）。根據(jù)GO富集分析（圖5B），差異基因主要與皮膚上發(fā)育、核糖體合成、嘌呤核苷酸代謝等生物進(jìn)程有關(guān)；將差異基因進(jìn)行KEGG功能富集到癌癥信號(hào)通路、核糖體合成相關(guān)信號(hào)通路等，說(shuō)明其可能直接或間接參與MmuPV1感染尾部皮膚后病變的發(fā)生（圖5C）。

圖5MmuPV1感染小鼠尾部轉(zhuǎn)錄水平差異表達(dá)

A：差異表達(dá)基因火山圖；B：GO富集分析結(jié)果；C：KEGG通路富集分析結(jié)果

1.小鼠尾部MmuPV1感染

三溴乙醇小鼠麻醉，按每公斤體重腹腔注射240mg。待小鼠麻醉后，利用刀片在小鼠尾部反復(fù)輕輕刮擦20次左右，取10μl病毒液（6×108 VGE）滴加到刮擦過的尾部。每周觀察2次，待尾部病變直徑接近1cm時(shí)，安樂小鼠并收集腫瘤。部分腫瘤組織置于福爾馬林固定液用于組織學(xué)研究；部分腫瘤組織置于液氮中速凍，并保存于-80℃進(jìn)行后續(xù)感染和分子研究。

2.小鼠尾部MmuPV1DNA提取

使用分離柱法分離組織DNA。取MmuPV1感染尾部的增生部位，利用DNeasy Blood & Tissue Kit（Qiagen）。提取方法如下：將25mg切成盡量小塊置于1.5ml EP管中，加入180μlBuffer ATL及20μl Proteinase K，震蕩混勻，56℃孵育1-3h至增生組織完全裂解，孵育期間間斷震蕩；震蕩15s，加入200μl Buffer AL，震蕩充分混合，加入200μl無(wú)水乙醇，再次充分震蕩混勻；混合物轉(zhuǎn)移至DNeasy Mini spin column，6,000×g（8,000rpm）離心1min，棄廢液；柱子中加入500μl Buffer AW1，6000×g（8000rpm）離心1min，棄廢液；柱子中加入500μl Buffer AW2，20,000×g（14,000rpm）離心3min，棄廢液；將珠子置于新的1.5ml或2ml離心管，在柱子的膜上加200μl Buffer AE，室溫靜置1min，≥6000×g（8000rpm）離心1min。

3.小鼠尾部MmuPV1的PCR檢測(cè)

將小鼠尾部增生組織置于PBS中，利用勻漿器高速勻漿3min。勻漿液10，000rpm離心3min，將上清液轉(zhuǎn)移到新1.5ml EP管中。配置反應(yīng)體系，上下游引物分別為對(duì)MmuPV1 E2基因，MmuPV1_E2_1（5`-GCC CGA AGA CAA CAC CGC CAC G-3`）和MmuPV1_E2_2（5'-CCT CCG CCT CGT CCC CAA AAA ATG G-3'）。反應(yīng)條件：95℃ 10min；95℃ 15s；60℃ 60s，68℃ 45s，40個(gè)循環(huán)；68℃ 10min。

4.小鼠尾部MmuPV1感染組織病理學(xué)檢測(cè)

安樂小鼠，解剖采集尾部增生部位皮膚，進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE染色）。方法簡(jiǎn)述：組織塊經(jīng)10%的多聚甲醛固定、脫水透明后，置于熔化的石蠟中進(jìn)行包埋，進(jìn)而制作石蠟切片；切片脫蠟后進(jìn)行HE染色；進(jìn)一步的脫水透明，封片，顯微鏡下觀察。

5.RNAscope原位雜交

安樂小鼠，解剖采集尾部增生部位皮膚置于10%多聚甲醛固定、脫水透明后，置于熔化的石蠟中進(jìn)行包埋，進(jìn)而制作石蠟切片，切片進(jìn)行后續(xù)RNAscope原位雜交，具體實(shí)驗(yàn)步驟如下：

（1）載玻片脫蠟：60℃烤片1h，二甲苯脫蠟2次，每次5min，100%酒精2次，每次1min，切片朝上放到吸水紙上，室溫靜置干燥5min；

（2）雙氧水靶標(biāo)修復(fù)：切片滴加約5-8滴RNAscope?雙氧水，室溫孵育10min，蒸餾水清洗切片3-5次后，將載玻片浸沒到煮沸的1×RNAscope?靶標(biāo)修復(fù)液中放置15min，蒸餾水清洗3-5次，100%乙醇中清洗1次，室溫靜置干燥；

（3）畫疏水圈：使用ImmedgeTM疏水筆在樣本周圍化疏水圈2-4次；

（4）將載玻片置于HybEZTM載玻片架中，滴加5滴RNAscope?蛋白酶plus，放入HybEZTM濕盒，放回40℃雜交爐 30min。蒸餾水洗3次；

（5）探針雜交：載玻片滴加4滴E1^E4探針，再放入濕盒，雜交爐40℃孵育2h，將載玻片浸沒于1×清洗緩沖液中，室溫，每次2min；

（6）雜交Amp1：載玻片上滴加4滴Amp1，放回濕盒，雜交爐雜交爐40℃孵育30min，將載玻片浸沒于1×清洗緩沖液中，室溫，每次2min；

（7）雜交Amp2：載玻片上滴加4滴Amp2，放回濕盒，雜交爐雜交爐40℃孵育15min，將載玻片浸沒于1×清洗緩沖液中，室溫，每次2min；

（8）雜交Amp3：載玻片上滴加4滴Amp3，放回濕盒，雜交爐雜交爐40℃孵育30min，將載玻片浸沒于1×清洗緩沖液中，室溫，每次2min；

（9）雜交Amp4：載玻片上滴加4滴Amp4，放回濕盒，雜交爐雜交爐40℃孵育15min，將載玻片浸沒于1×清洗緩沖液中，室溫，每次2min；

（10）雜交Amp5：載玻片上滴加4滴Amp5，放回濕盒，雜交爐雜交爐40℃孵育30min，將載玻片浸沒于1×清洗緩沖液中，室溫，每次2min；

（11）雜交Amp6：載玻片上滴加4滴Amp6，放回濕盒，雜交爐雜交爐40℃孵育15min，將載玻片浸沒于1×清洗緩沖液中，室溫，每次2min；

（12）信號(hào)檢測(cè)：棄掉液體后，載玻片上滴加120μl DAB工作液，室溫靜置10min，去除DAB工作液，蒸餾水洗3-5次；

（13）載玻片復(fù)染：載玻片放入蘇木精染色液中，室溫靜置2min，蒸餾水洗3-5次，利用0.02%氨水洗一次，蒸餾水再洗3-5次；

（14）載玻片脫水：載玻片放入70%乙醇，室溫靜置2min，100%酒精，室溫靜置2min，100%酒精，室溫靜置2min，二甲苯溶液，室溫靜置5min；

（15）封片：載玻片風(fēng)干后，滴加1滴Cytoseal封片劑，蓋上蓋玻片，風(fēng)干載玻片5min。

6.轉(zhuǎn)錄組差異分析

TRIzol法提取尾部增生皮膚（實(shí)驗(yàn)組）及尾部正常皮膚（空白對(duì)照組）樣本RNA，通過瓊脂糖凝膠電泳分析RNA完整性及是否有DNA污染、Nanodrop進(jìn)行RNA濃度和純度檢測(cè)。送到北京諾禾致源科技股份有限公司測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行RNA測(cè)序。通過文庫(kù)構(gòu)建并測(cè)序獲得原始測(cè)序序列后進(jìn)行信息分析流程，主要由兩個(gè)階段：a）評(píng)估測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量；b）信息挖掘及分析。將實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組RNA-seq序列進(jìn)行對(duì)比，鑒定分析差異基因表達(dá)和聚類分析（包括差異基因數(shù)目統(tǒng)計(jì)、GO富集分析、KEGG通路富集分析），采用edgeR軟件進(jìn)行表達(dá)差異顯著性分析。

1.病原學(xué)

乳頭瘤病毒（Papillomaviruses, PV）為無(wú)包膜雙鏈DNA病毒，可感染粘膜和/或皮膚上皮細(xì)胞，具有高度宿主特異性。人乳頭瘤病毒（human papillomaviruses, HPV）可導(dǎo)致人類宮頸癌、皮膚癌、口腔癌、肛門癌等惡性病變，目前尚無(wú)針對(duì)HPV感染后病變或引起惡性癌癥的治療方法。由于病毒的宿主特異性，HPV感染人，不能感染其它動(dòng)物，這限制了病毒感染動(dòng)物模型的建立。

2011年印度科學(xué)家發(fā)現(xiàn)小鼠乳頭瘤病毒（Mouse papillomavirus type 1, MmuPV1）可感染實(shí)驗(yàn)室小鼠品系，首次為乳頭瘤狀病毒感染小鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭苽涮峁C(jī)會(huì)。與HPV一樣，MmuPV1也屬于乳多空病毒科乳頭瘤病毒屬，由閉合環(huán)狀雙鏈DNA分子組成，其長(zhǎng)度為7510bp，含有一條編碼鏈，至少編碼7個(gè)ORFs。

乳頭瘤病毒對(duì)熱敏感，70℃30分鐘可滅活，但在室溫干燥環(huán)境下3天，病毒活力仍有50%。乙醇、異丙醇、戊二醛、鄰苯二甲醛、苯酚等常用消毒劑均無(wú)法殺滅病毒。0.55%次氯酸鈉和1.2%過氧乙酸可滅活病毒。

2.來(lái)源

MmuPV1主要由小鼠自身攜帶。

3.發(fā)病機(jī)制

MmuPV1感染免疫健全小鼠品系不會(huì)引起相應(yīng)乳頭瘤病，如BALB/c、C57/BL6等；但其感染免疫缺陷小鼠品系時(shí)，尤其T細(xì)胞缺失小鼠品系可導(dǎo)致乳頭瘤狀增生甚至癌癥，但尚不明確何種T細(xì)胞亞群在其中發(fā)揮作用。參與乳頭瘤病毒致癌作用最重要的兩個(gè)基因是E6和E7早期基因，與多個(gè)靶基因結(jié)合后使其功能性失活，從而導(dǎo)致組織器官病變甚至惡性腫瘤。MmuPV1也含有致瘤性的E6和E7基因。

4.流行特征

2011年，印度科學(xué)家Ingle A等人首次在T細(xì)胞缺陷小鼠NMRI-Foxn1nu/ Foxn1nu裸鼠中分離鑒定得到小鼠乳頭瘤病毒MmuPV1，其病變區(qū)組織病理學(xué)分析顯示與PV相關(guān)疾病特征一致，即具有PV特異性抗原陽(yáng)性的空泡細(xì)胞乳頭狀突起。該病毒可向未感染部位橫向傳播，并可傳染其他NMRI-FoxN1nu/FoxN1nu裸鼠，以及誘導(dǎo)免疫健全S/RV/Cri-ba/ba小鼠皮膚病理?yè)p傷。多個(gè)免疫健全小鼠品系感染小鼠乳頭瘤病毒均不會(huì)引起乳頭瘤病，只有缺失T細(xì)胞的小鼠品系對(duì)小鼠乳頭瘤病毒更易感。目前，尚未見對(duì)其流行情況的調(diào)查研究。

5.臨床表現(xiàn)

MmuPV1感染可引起某些品系小鼠皮膚癌。經(jīng)紫外線照射的免疫健全或免疫缺陷小鼠品系的皮膚感染MmuPV1后，可產(chǎn)生皮膚疣，甚至癌癥，因此，MmuPV1感染小鼠模型可作為HPV相關(guān)皮膚疾病和癌癥進(jìn)程的首選模型。HPV有關(guān)口腔癌在年輕男性中呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，MmuPV1感染小鼠舌頭、舌根和口咽部等可作為研究HPV相關(guān)口腔癌的理想模型。HPV可感染生殖生殖器，并且新生兒復(fù)發(fā)性呼吸道乳頭瘤病就是由于HPV感染導(dǎo)致，皮膚感染MmuPV1的小鼠不但可以繼發(fā)感染皮膚，也可繼發(fā)感染粘膜組織。這樣，MmuPV1感染小鼠模型也有助于伴侶間病毒橫向傳播及母嬰垂直傳播研究。

6.培養(yǎng)特性

因?yàn)槿轭^瘤病毒的生命周期依賴于宿主上皮細(xì)胞分化，通過擦傷的上皮細(xì)胞或粘膜組織感染宿主從而進(jìn)入宿主基底層細(xì)胞。基底層細(xì)胞感染后，潛伏乳頭瘤病毒導(dǎo)致相關(guān)疾病發(fā)生。因此，乳頭瘤病毒的復(fù)制過程依賴于角質(zhì)細(xì)胞的分化過程。由于無(wú)法在體外實(shí)現(xiàn)上皮細(xì)胞的分化，所以現(xiàn)在還不能成功體外培養(yǎng)乳頭瘤病毒。MmuPV1可感染T細(xì)胞缺失小鼠品系，引起感染部位乳頭瘤狀病變，可用于病毒制備。部分免疫健全品系也可引起乳頭瘤狀病變，也可用于病毒制備及感染同種小鼠品系或其它小鼠品系。

模型背景：

1、小鼠乳頭瘤病毒信息

2011年分離得到的小鼠乳頭狀病毒可感染實(shí)驗(yàn)室小鼠品系，首次提供可用于乳頭瘤狀病毒小鼠模型構(gòu)制備及相關(guān)研究。與HPV一樣，MmuPV1也是環(huán)狀雙鏈DNA，其基因組長(zhǎng)度為7510bp，至少編碼7個(gè)開放閱讀框（ORFs），基于其在病毒基因組內(nèi)的保守位置以及與其它乳頭瘤病毒長(zhǎng)度相當(dāng)?shù)腛RF，分別命名為早期編碼區(qū)E1、E2、E4、E6和E7及晚期編碼區(qū)L1和L2。本模型使用小鼠乳頭瘤病毒（the mouse papillomavirus, MmuPV1）為賓夕法尼亞州立大學(xué)Jiafen Hu教授友情饋贈(zèng)。

2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背景信息

SPF級(jí)6-8周齡NU/NU nude mouse，雌性購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。該品系小鼠來(lái)源于NIH，名稱Crl: NU-Foxn1nu，為無(wú)毛、白化背景，因攜帶Foxn1nu突變，胸腺發(fā)育不良，不能產(chǎn)生T細(xì)胞。

3、研究背景

人乳頭瘤病毒（HPV）持續(xù)感染可引起約5%人類癌癥，包括宮頸癌、皮膚癌、口腔癌、肛門癌等?，F(xiàn)有疫苗可有效預(yù)防針對(duì)HPV的感染，但目前尚無(wú)針對(duì)HPV感染后病變或引起惡性腫瘤的有效治療方法，仍需加強(qiáng)相關(guān)領(lǐng)域研究。由于HPV感染具有宿主特異性，只能感染人，尚未建立理想的HPV感染動(dòng)物模型。在病毒嗜性和宿主免疫情況的背景下，構(gòu)建了數(shù)個(gè)HPV參比動(dòng)物模型，如牛、夠、兔等PV感染模型，但高成本和技術(shù)限制了研究的進(jìn)展。2011年分離得到小鼠乳頭瘤病毒（MmuPV1）可感染實(shí)驗(yàn)室小鼠品系，并引發(fā)小鼠惡性腫瘤，是目前唯一可用于乳頭瘤小鼠感染模型創(chuàng)制的病毒。MmuPV1感染小鼠模型具有動(dòng)物體積小，易于操作，試劑盒豐富等諸多優(yōu)點(diǎn)。因此，MmuPV1感染小鼠模型為乳頭瘤病毒感染進(jìn)一步深入研究提供關(guān)鍵平臺(tái)。

MmuPV1易感動(dòng)物為T細(xì)胞缺陷的小鼠。感染免疫健全小鼠一般不出現(xiàn)臨床癥狀，但可在感染部位檢測(cè)到病毒基因組，即使出現(xiàn)乳頭瘤狀增生，均可在一段時(shí)間后，清除病毒，即檢測(cè)不到病毒基因組。高劑量1×1012 copies MmuPV1感染免疫功能健全的SENCAR小鼠，大部分可在感染部位出現(xiàn)乳頭瘤樣病變，但高劑量1×1012copies MmuPV1感染野生型C57BL/6則無(wú)病變產(chǎn)生。