該模型是模擬免疫機(jī)制導(dǎo)致再障，還有很多不同品系小鼠免疫細(xì)胞誘發(fā)的嘗試。另外一種類型的再障與遺傳缺陷有關(guān)包括范科尼貧血（FA）、先天性角化不良（DKC）和Shwachman-Diamond綜合征（SDS），這分別是由于范科尼貧血、端粒酶相關(guān)（DKC、TERT、TERT）和SBDS基因中的遺傳性病變所致。陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿癥（PNH）是PIG-a基因發(fā)生體細(xì)胞突變，導(dǎo)致造血細(xì)胞缺乏糖基磷脂酰肌醇（GPI）錨定蛋白（如CD55、CD59），臨床表現(xiàn)為血管內(nèi)溶血、全血細(xì)胞減少和血栓形成傾向。這些基因改變包括突變或染色體截?cái)?、增加或易位，?dǎo)致包括BM在內(nèi)的多個(gè)器官的功能改變。通過構(gòu)建基因工程動(dòng)物模型的開發(fā)有助于這類疾病的研究。

進(jìn)行電離輻射照射設(shè)備是自屏蔽，對(duì)操作人及環(huán)境安全。

1.外周血常規(guī)指標(biāo)測(cè)定外周血各項(xiàng)指標(biāo)中AA模型組小鼠與對(duì)照組相比見表1，WBC降低70．2％(P<0．05)，PLT降低39．4％(P<0．05)，RBC降低19．9％(P<0．O5)，HGB降低17．0％(P<0．05)，Ret降低30．4％(P<0．05)；IR組與對(duì)照組相比，WBC降低52．1％(P<0．05)，其余指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2． 骨髓有核細(xì)胞免疫學(xué)分型每只小鼠均取左側(cè)股骨沖洗骨髓后計(jì)數(shù)BMMNC，從模型組較對(duì)照組低51．84％(P<0．05)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原進(jìn)行分型，見表2。AA模型組Gr-1 、Ter-119 、CDllb 細(xì)胞比率均低于對(duì)照組(28．52％，P<0．05；75．63％ ，P<0．05；10．22％ ，P>0．05)；AA模型組CD5 、B220 細(xì)胞比率高于對(duì)照組(51．28％，P<0．05；78．21％ ，P<0．05)。IR組與對(duì)照組相比，只有BMMNC計(jì)數(shù)和B220 細(xì)胞2項(xiàng)指標(biāo)有顯著性差異。

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物近交系DBA／2小鼠2只，22—24 g，雄性，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供(合格證號(hào)：SCxK(京)2005．0013)。近交系BALB／C小鼠3O只，20—22 g，雄性，由中國(guó)輻射防護(hù)研究院提供(動(dòng)物許可證編號(hào)：scxK(京)2007．0001)。全價(jià)清潔飼料由北京科奧協(xié)力飼料有限公司提供。

2．試劑流式檢測(cè)用抗體均是eBioscience產(chǎn)品。

3．照射條件γ射線，劑量為5.0Gy，劑量率為1.1Gy／min。

4. 動(dòng)物模型建立方法

4.1 動(dòng)物分組取生長(zhǎng)良好的BALB／C小鼠30只，隨機(jī)分為3組，每組10只，即對(duì)照組、照射組、AA模型組。對(duì)照組進(jìn)行假照射，照射組和AA模型組進(jìn)行照射。

4.2 AA動(dòng)物模型制備將DBA／2小鼠(供鼠)頸椎脫臼法處死，常規(guī)消毒后，在超凈工作臺(tái)中無菌取出胸腺，置于含10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，除去粘附的結(jié)締組織、剪碎、輕磨、200目不銹鋼網(wǎng)過濾，制成單細(xì)胞懸液，臺(tái)盼藍(lán)鑒定細(xì)胞活性(在95％以上)，計(jì)數(shù)后用RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)細(xì)胞濃度為5×106／ml備用。BALB／c小鼠經(jīng)5.0Gy劑量γ射線全身照射，4 h后經(jīng)尾靜脈輸人DBA／2小鼠的胸腺細(xì)胞懸液0.2 ml／只，含細(xì)胞數(shù)為1×106個(gè)，建立AA小鼠模型10只。對(duì)照組和照射對(duì)照組尾靜脈注入等量的RPMI1640培養(yǎng)液。實(shí)驗(yàn)第15日檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)評(píng)估動(dòng)物模型是否成功構(gòu)建。

5. 實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)

5.1 外周血常規(guī)指標(biāo) 測(cè)定模型制備至第15日，小鼠眼球取血200／A，EDTA．K3抗凝，用自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(poeH．100i，希森美康，日本)測(cè)定外周血白細(xì)胞數(shù)(WBC)、紅細(xì)胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白含量(HGB)、血小板(PLT)等指標(biāo)；取抗凝血100uL，1％煌焦油藍(lán)染色后鏡下計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞(Ret)。

5.2骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)處死小鼠，取小鼠左側(cè)股骨，用2 ml沖洗液沖出骨髓，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀上測(cè)定骨髓有核細(xì)胞數(shù)(BMMNC)。

1、造模因素信息

模型小鼠接受高劑量電離輻射。照射條件為γ射線，劑量為5.0Gy，劑量率為1.1Gy／min。

2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背景信息

近交系DBA／2小鼠；BALB／C小鼠。

3、研究背景

再生障礙性貧血，系多種病因引起的造血障礙，導(dǎo)致紅骨髓總?cè)萘繙p少，造血衰竭，全血細(xì)胞減少為主要表現(xiàn)的一組綜合征。其發(fā)病機(jī)制除與造血干細(xì)胞本身缺陷、造血微環(huán)境損傷有關(guān)外，免疫功能是再障重要的發(fā)病原因。

AA動(dòng)物模型構(gòu)建方法有物理方法、化學(xué)方法、免疫介導(dǎo)方法和混合方法。評(píng)估指標(biāo)主要包括，全血細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞減少，骨髓象三系血細(xì)胞減少。

參考文獻(xiàn)：

1.額爾敦都楞,布仁巴圖,巴圖德力根,韓志強(qiáng),金 花,娜仁其其格,莫日根畢力格.大鼠再生障礙性貧血模型制備[J].中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志,2012,(10):43~45.

2.孫紀(jì)元,王四旺,謝艷華,施新猷.再生障礙性貧血的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志,2000,(4):210~212.

3.張恒; 王月英; 吳紅英; 李德冠; 王小春; 路璐; 常建輝; 翟志斌; 孟愛民. 再生障礙性貧血小鼠模型的免疫學(xué)評(píng)價(jià)，中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷, 2011,15(9):1421-1424

4.張恒，王月英，李德冠，王小春，路璐，吳紅英，常建輝，翟志斌，孟愛民. E838對(duì)再生障礙性貧血小鼠造血功能的治療作用. 中國(guó)生化藥物雜志，2012，33（1）：1-4

5.Asada S, Kitamura T. Clonal hematopoiesis and associated diseases: A review of recent findings. Cancer Sci. 2021 Oct;112(10):3962-3971.

6.Scheinberg P, Chen J. Aplastic anemia: what have we learned from animal models and from the clinic. Semin Hematol. 2013 Apr;50(2):156-64. doi: 10.1053/j.seminhematol.2013.03.028. Epub 2013 Jun 11. PMID: 24216172.