IBD的發(fā)病機制尚未完全闡明，建立合適的IBD動物模型對研究IBD的發(fā)病

機制及其治療措施具有重要意義。經典的造模方法有：自發(fā)模型、遺傳模型、過繼轉移模型和誘導模型。這些模型都有其自身的缺點，例如操作步驟復雜、動物死亡率高、發(fā)病機制與人發(fā)病機制相差較遠等。

葡聚糖硫酸鈉（DSS），是一種具有抗凝血特性的化學大腸桿菌素，能夠刺激大腸上皮單層襯里受損，導致促炎性腸道內容物（如細菌及其產物）擴散到底層組織，引起結腸組織炎癥發(fā)生。DSS結腸炎模型快速、簡單、重復性和可控性高，是誘導急性、慢性和復發(fā)性腸道炎癥模型的常用造模手段。

DSS誘導結腸炎的機制與臨床結腸炎發(fā)病機制非常相近，是研究結腸炎發(fā)病機制的理想模型。通過不同濃度DSS反復交替作用誘導結腸炎模型，可以通過控制藥物濃度和給藥次數，能夠有效減輕結腸損傷程度，降低該疾病模型的動物死亡率。

DSS能夠成功誘導小鼠慢性結腸炎實驗動物模型, 其操作簡單, 結果穩(wěn)定可靠，不可遺傳，是一種安全有效的結腸炎造模方法。在實際運用中, 更為推薦1%，2%濃度交替作用誘導炎癥發(fā)生。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 選擇40 只健康雌性BALB/cJRj小鼠，體質量20-25 g，5只/盒分配于SPF 級屏障系統(tǒng)中，溫度 (22±2) ℃，濕度50% ～ 60%，12 h 循環(huán)照明，小鼠自由攝取食、水。

1.2儀器與試劑 糞便隱血檢測試劑盒； EG1160石蠟包埋機( LEICA)。

2 方法

2.1 動物模型制備 用無菌水分別配置1%和2%的葡聚糖硫酸鈉（DSS）（wt/vol）。先給予動物2％DSS劑量飲水5天，再給予1％DSS 劑量飲水10天，再給予2％DSS劑量飲水 7天。每天稱量小鼠體重和消耗的DSS量并記錄。每三天檢測一次小鼠糞便稠度改變和糞便出血跡象。根據小鼠體重減輕、大便黏稠度、腹瀉和大便出血的綜合得分計算疾病活動指數（DAI），用以評估結腸炎的臨床進展。

2.2 標本采集及處理 在實驗結束后，稱取小鼠體質量，用1%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，仰臥位置于動物實驗臺上，固定四肢，暴漏胸腹部，經下腔靜脈采血。全血室溫靜置30 min后，3,000 rpm，4°C離心15 min，分離血漿，測定髓過氧化物酶（MPO）水平。解剖小鼠腹腔，取結腸組織，濾紙吸干后稱重，并測量結腸長度，取近端、中端或遠端各一段結腸進行石蠟包埋。其余結腸組織分裝于1.5 mL 離心管中，-80℃低溫保存。

一、疾病概述

炎癥性腸病（IBD）是一種病因不明、異常免疫介導的慢性腸道炎癥性疾病，它反復發(fā)作，甚至可以伴隨患者終生，包括克羅恩病以及潰瘍性結腸炎兩種疾病。在臨床上，IBD患者主要表現為反復的腹痛、腹瀉、黏液血便，甚至出現各種全身并發(fā)癥如視物模糊、關節(jié)疼痛、皮疹等。IBD也會增加腸道受累部位癌變的風險。隨著生活方式的改變，我國已經成為IBD發(fā)病率最高的亞洲國家。目前，IBD治療藥物主要以降低炎癥、提高患者的生活質量為主，但是這些藥物的副作用很大，且不能夠長期用于維持治療。動物模型可以很好的模擬臨床發(fā)病過程以及病理生理改變，為探究IBD的發(fā)病機制和治療手段提供研究基礎。目前已經開發(fā)出多種IBD動物模型，主要包括自發(fā)模型、遺傳模型、過繼轉移模型和誘導模型。其中DSS誘導的急性和慢性結腸炎模型是IBD研究中應用最廣泛的兩種誘導型動物模型。

二、模型背景

1、造模因素信息

葡聚糖硫酸鈉誘導

2、實驗動物背景信息

8-12周齡的雌性BALB/cJRj小鼠，體重20-25g

3、研究背景

炎癥性腸?。↖BD）是腸道的慢性緩解性炎癥性疾病[1]，包括克羅恩病和潰瘍性結腸炎兩種疾病。其臨床癥狀主要包括腹部痙攣、血性腹瀉和體重減輕，并伴隨有多種腸外癥狀[2]。目前IBD的病因尚不清楚，為了研究IBD的發(fā)病機制，現在已經開發(fā)出多種結腸炎的動物模型，模型范圍從某些物種的易感菌株自發(fā)產生的模型到施用特定濃度的誘導化學品的模型[3]。這些模型是不可或缺的工具，可以用于探究IBD的潛在發(fā)病機制以及評估藥物的治療效果。在各種化學誘導的結腸炎模型中，由于葡聚糖硫酸鈉鈉（DSS）誘導的結腸炎模型操作簡單，并且與臨床結腸炎有許多相似支，因此該模型是IBD最常用和最好描述的模型[3]。

葡聚糖硫酸鈉（DSS），是一種帶負電的水溶性硫酸多糖，分子量高度可變，范圍為5-1400 kDa[4]。作為一種具有抗凝血特性的化學大腸桿菌素，DSS誘導腸道炎癥的機制是由于大腸上皮單層襯里受損，導致促炎性腸道內容物（如細菌及其產物）擴散到底層組織，導致腸道組織病理性改變[5]。DSS結腸炎模型制作方式簡單、誘導周期短、具有良好的模型重復性和可控性，因此在IBD研究中非常流行。通過改變DSS的給藥濃度和給藥頻率，可以建立急性、慢性和復發(fā)性腸道炎癥模型。

為了開發(fā)針對腸道炎癥模型治療的新靶點藥物，根據不同濃度DSS給藥方案，在飲用水中施用DSS會產生慢性或急性結腸炎。我們通過控制DSS藥物誘導濃度和給藥次數，改善了結腸損傷程度,有效降低了該疾病模型的動物死亡率。

[1]Podolsky DK. Inflammatory bowel disease.N Engl J Med.2002; 347: 417–429.

[2] Sands, B.E. From symptom to diagnosis: clinical distinctions among various forms of intestinal inflammation.Gastroenterology.126.

[3]Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., & Neurath, M.F . Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.Nat. Protoc.2, 541-546(2007).

[4] Steele CW, Karim SA, Foth M, et al. CXCR2 inhibition suppresses acute and chronic pancreatic inflammation. J Pathol. 2015 Sep;237(1):85-97.

[5] Laroui, H., Ingersoll, S.A., Liu, H.C., Baker, M.T.,Ayyadurai, S., Charania, M.A., Laroui, F., Y an,Y ., Sitaraman, S.V ., and Merlin, D. 2012. Dextran sodium sulfate (DSS) induces colitis in miceby forming nano-lipocomplexes with medium-chain-

length fatty acids in the colon.PLoS ONE.7:e32084