綜上，BCR/ABL1轉基因斑馬魚成為首個人類CML疾病的斑馬魚模型。利用該模型將有望揭示CML疾病更為精準的發(fā)病機制及急變關鍵因子，闡明相關的信號通路，發(fā)現(xiàn)臨床早期診斷、預后、治療效果評價的分子標記物或靶向基因，以此可進行針對CML的斑馬魚活體高通量小分子篩選，Tg(hsp70:p210BCR/ABL)轉基因斑馬魚有望為治療CML的新藥篩選提供一個有價值的平臺。

圖1.pToL hsp70: p210BCR/ABL1質(zhì)粒結構與Tg(hsp70:p210BCR/ABL1)品系證實

Tg(hsp70:p210BCR/ABL1)轉基因斑馬魚是利用已構建好的含hsp70啟動子以及BCR/ABL1的質(zhì)粒和Tol2轉座系統(tǒng)，通過顯微注射技術于斑馬魚單細胞時期將完整的編碼序列整合到宿主基因組中，從而產(chǎn)生該轉基因斑馬魚品系。 轉基因斑馬魚的Tg(hsp70:p210BCR/ABL1)通過PCR得到證實。

圖2.Tg(hsp70:p210BCR/ABL1)轉基因斑馬魚BCR/ABL融合基因表達情況

在Tg(hsp70:p210BCR/ABL1)轉基因斑馬魚系中，通過熱激誘導BCR/ABL融合基因表達，BCR/ABL融合基因在mRNA和蛋白質(zhì)各水平表達于該轉基因斑馬魚品系幼年時期顯著上調(diào)。說明該轉基因品系斑馬魚通過熱激處理可以使BCR/ABL融合基因穩(wěn)定地強表達。

圖3.Tg(hsp70:p210BCR/ABL1)轉基因斑馬魚幼年時期髓系細胞發(fā)育

在Tg(hsp70:p210BCR/ABL1)轉基因斑馬魚系（斑馬魚CML模型）中，通過髓系細胞、紅系細胞、淋巴系細胞特異標記基因l-plastin（lcp）、lyz、mfap4、整胚原位雜交實驗，以及SB細胞化學染色實驗結果得知，p210BCR/ABL在斑馬魚體內(nèi)表達可誘導l-plastin+整體髓系細胞數(shù)目增多，lyz+中性粒粒細胞數(shù)目增多、mfap4+巨噬細胞增多，但增多的巨噬細胞功能存在缺陷。p210BCR/ABL對Tg(hsp70:p210BCR/ABL1)轉基因斑馬魚胚胎造血的主要影響表現(xiàn)為髓系細胞增多。這與臨床上CML血液表型主要表現(xiàn)為粒系增生趨勢一致。

圖4.Tg(hsp70:p210BCR/ABL1)轉基因斑馬魚成年時期的血液表型

通過瑞氏-吉姆薩細胞染色實驗檢測，斑馬魚CML模型成年時期血液表型主要表現(xiàn)為前體細胞、發(fā)育偏成熟的中性粒細胞（中幼粒、晚幼粒及成熟粒細胞）、單核/巨噬細胞、淋巴細胞和血小板這幾類細胞中的一類或多類細胞增多，與MPN血液表型類似。

圖5. TKIs可緩解Tg(hsp70:p210BCR/ABL1)轉基因斑馬魚胚胎期的異常造血

通過lcp整胚原位雜交實驗可發(fā)現(xiàn)，在imatinib、dasatinib和bosutinib對熱激誘導表達BCR/ABL的Tg(hsp70:p210BCR/AB1L)轉基因斑馬魚胚胎中l(wèi)cp+細胞數(shù)目相對安慰劑組明顯減少。我們知道TKIs藥物靶點為p210BCR/ABL激酶口袋結構域，可緩解酪氨激酶活性異常升高引起的各種異常的生物學活動。我們可以看到Tg(hsp70:p210BCR/ABL1)轉基因斑馬魚胚胎中l(wèi)cp+細胞數(shù)目相對安慰劑組明顯減少，說明其對imatinib、dasatinib和bosutinib具有分子響應，在一定程度上說明了Tg(hsp70:p210BCR/ABL)轉基因斑馬魚胚胎造血異常的分子機制很有可能是由于p210BCR/ABL在Tg(hsp70:p210BCR/ABL)轉基因斑馬魚胚胎體內(nèi)表達引起酪氨酸激酶異常增高，而異常調(diào)控造血干細胞發(fā)育所致。