CYP2E1與氧化應(yīng)激、代謝相關(guān)，該轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可以用于阿爾茨海默病的發(fā)病機(jī)制研究。

本實(shí)驗(yàn)采用健康成年SPF級(jí)老鼠。飼料墊料均為高壓滅菌產(chǎn)品，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物用水均經(jīng)過除菌處理。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以完整的包裝直接進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，觀察適應(yīng)5天后無異常情況，方進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)過程中動(dòng)物操作均符合動(dòng)物倫理學(xué)規(guī)范，對(duì)環(huán)境和生態(tài)影響等符合國(guó)家相關(guān)法律規(guī)定。

獲得首建鼠后，7日內(nèi)剪尾，提取基因組DNA，PCR鑒定基因型如圖2。首建鼠與野生大鼠雜交，得到子代大鼠，犧牲分離腦組織提取蛋白進(jìn)行western blot鑒定，如圖3結(jié)果顯示：CYP2E1在腦的海馬和皮層表達(dá)均高于野生對(duì)照大鼠。

PDGF啟動(dòng)子下游插入CYP2E1的cDNA構(gòu)建腦特異過表達(dá)載體，顯微注射獲得轉(zhuǎn)基因大鼠。

阿爾茨海默病(Alzheimer disease , AD) 是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)行性的退行性疾病，臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性記憶減退和認(rèn)知障礙，我國(guó)65歲以上老人癡呆癥的發(fā)病率為5.56%。

CYP2E1基因編碼一個(gè)細(xì)胞色素P450超家族的酶。細(xì)胞色素P450蛋白是一種單加氧酶，對(duì)藥物代謝和膽固醇、甾體和其他脂類的合成進(jìn)行催化。CYP2E1蛋白定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，由乙醇、糖尿病狀態(tài)和饑餓誘導(dǎo)。該酶既代謝內(nèi)源性底物，如乙醇、丙酮和縮醛，也代謝外源性底物，包括苯、四氯化碳、乙二醇和亞硝胺。CYP2E1酶的底物多樣，因此可能參與糖異生、肝硬化、糖尿病和癌癥等多種過程。氧化應(yīng)激、能量代謝是AD的發(fā)病機(jī)制之一，因此CYP2E1可能對(duì)于AD的病理發(fā)展具有調(diào)節(jié)作用。