動(dòng)物模型制備過程中，由飼養(yǎng)人員進(jìn)行日常飼喂，由獸醫(yī)進(jìn)行監(jiān)督管理，造模期間動(dòng)物狀態(tài)良好，每天記錄病死只數(shù)，造模選用DOCA加高鹽喂水，對(duì)動(dòng)物傷害小，每周稱重一次，未使用微生物，對(duì)環(huán)境沒有影響，造模方法簡(jiǎn)便易，行重復(fù)性好，不可遺傳。

主動(dòng)脈夾層瘤患者的臨床特征：主動(dòng)脈夾層瘤導(dǎo)致的主動(dòng)脈直徑增厚超過50%。

該法造模的特點(diǎn)：大體及超聲檢測(cè)能夠發(fā)現(xiàn)主動(dòng)脈直徑增厚超過50%；夾層瘤部冰凍切片HE 及馬松染色可見夾層瘤形成，纖維化加劇，彈力纖維增厚。

1. 大體及超聲結(jié)果分析

2.主動(dòng)脈瘤冰凍切片HE及馬松染色

3. 血管浸潤免疫細(xì)胞染色分析

1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選擇健康雄性C57小鼠小鼠，體質(zhì)量18-22 g，均購于北京華阜康華生物科技股份有限公司。飼養(yǎng)于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所動(dòng)物中心動(dòng)物房?jī)?nèi)，5只/盒屏障系統(tǒng)中，溫度(22±2) ℃，濕度50%～60%，12h 循環(huán)照明，小鼠自由攝取食、水，IACUC號(hào)：ILAS-YZW17007。

2 方法

2.1 動(dòng)物模型制備

C57小鼠根據(jù)體重，三溴乙醇麻醉0.18ml/10g體重，（360mg/kg體重）（三溴乙醇儲(chǔ)存液：25g三溴乙醇+15.5ml叔戊醇，使用液：0.50ml儲(chǔ)存液+39.5ml生理鹽水），俯臥位固定于加熱墊上保持體溫，背部頸部脫毛膏脫毛，酒精消毒處理，無菌手術(shù)剪剪開后背頸部皮膚，用鑷子將皮下探查出一個(gè)可以足夠裝下藥品的空間，將DOCA 緩釋泵塞入皮下，鑷子將該處皮膚對(duì)齊復(fù)合，無菌縫合線縫合皮膚，放置在加熱板上保暖，待蘇醒后放回鼠盒，手術(shù)后用止痛果凍緩解疼痛。

2.2 標(biāo)本采集及處理

完成DOCA+高鹽干預(yù)21天后，稱體重，麻醉后腹主動(dòng)脈采血至死亡，室溫靜置2h后于4℃3000r離心10分鐘提取血清，-80℃冰箱凍存。取心臟、主動(dòng)脈做石蠟切片，10%中性福爾馬林中固定，30%蔗糖脫水，冰凍切片包埋劑包埋并切片；進(jìn)行免疫組化及免疫熒光檢測(cè)，其余血管組織液氮冷凍-80℃保存，提取蛋白進(jìn)行免疫印跡檢測(cè)。

一、疾病概述

主動(dòng)脈瘤(aortic aneurysm) 指主動(dòng)脈壁局部或彌漫性的異常擴(kuò)張超過正常值 50%以上，壓迫周圍器官而引起癥狀，常發(fā)生在升主動(dòng)脈主動(dòng)脈弓、胸部降主動(dòng)脈、胸腹主動(dòng)脈和腹主動(dòng)脈，其發(fā)病率在老年人群中可以高達(dá)5-10%，并呈上升趨勢(shì)。主動(dòng)脈瘤可由多種因素引起，如家族遺傳、高血壓、動(dòng)脈硬化等，其主要病理改變?yōu)檠鼙趶椓w維斷裂及平滑肌細(xì)胞病變和血管外膜膠原沉積。

由于主動(dòng)脈瘤是一種慢性血管炎癥性疾病，近年來可以誘發(fā)血管炎癥的多種因素與該疾病的發(fā)生機(jī)制研究一直被人們關(guān)注，包括鹽皮質(zhì)激素、血管緊張素II等，其中醋酸脫氧皮質(zhì)酮（DOCA）是一種類固醇激素，可以與體內(nèi)的鹽皮質(zhì)激素受體結(jié)合，影響機(jī)體內(nèi)鈉水代謝，進(jìn)而誘發(fā)慢性炎癥反應(yīng)。有研究表明高鹽加醋酸脫氧皮質(zhì)酮（DOCA）緩釋刺激可以通過激發(fā)血管的炎癥反應(yīng)而誘發(fā)小鼠動(dòng)脈瘤的發(fā)生，并且該影響與年齡因素密切相關(guān)。本研究通過高鹽加DOCA的方法建立小鼠血管瘤模型，并觀察影響該疾病的相關(guān)通路因子，通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)增加或降低關(guān)鍵通路因子，進(jìn)一步探索該疾病的病理生理發(fā)生機(jī)制，為該疾病的預(yù)防治療提供新方法和思路。

二、模型背景

1、造模因素信息

DOCA 高鹽誘導(dǎo)主動(dòng)脈瘤小鼠模型

2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背景信息

C57BL/6小鼠

3、研究背景

在過去的幾十年中，已經(jīng)發(fā)展了幾種主動(dòng)脈瘤動(dòng)物模型[1]。其中，血管緊張素II在APOE-/-和LDLR-/-小鼠體內(nèi)輸注誘導(dǎo)主動(dòng)脈瘤的方法最為常見[2-7]。我們最近開發(fā)了一種新的小鼠主動(dòng)脈瘤模型，方法是給C57bL/6J雄性小鼠注射鹽皮質(zhì)激素受體激動(dòng)劑DOCA加高鹽，而不是單純的給予DOCA或高鹽，可以誘發(fā)主動(dòng)脈瘤的形成和破裂，這種模型具有年齡依賴性[8]。

與 ANGII灌注小鼠模型相比，DOCA+高鹽小鼠模型顯示了幾個(gè)獨(dú)特的特征，包括: (1)使用WT小鼠，而不是APOE-/-和LDLR-/-小鼠，避免了高脂血癥對(duì)動(dòng)脈瘤的潛在混淆作用; (2)使用200g/kg/day DOCA(足以誘發(fā)主動(dòng)脈瘤)的小鼠注射，血漿醛固酮濃度增加到10.58 nm [8]，低于心力衰竭患者[9,10]。這表明DOCA+高鹽模型是一種模擬人類疾病的病理模型，而不是由于使用了高劑量的感興趣分子而引起關(guān)注的藥理模型; (3) 使用10個(gè)月大的小鼠而不是10周大的小鼠(主要用于ANGII和其他模型)模擬人類主動(dòng)脈瘤。

參考文獻(xiàn):

1.Lindsay ME, Dietz HC (2011) Lessons on thepathogenesis of aneurysm from heritable conditions. Nature 473:308–316

2.Cassis LA, Gupte M, Thayer S et al (2009) ANG IIinfusion promotes abdominal aortic aneurysms independent of increased bloodpressure in hypercholesterolemic mice. Am J Physiol Heart Circ Physiol296:H1660–H1665

3. Cassis LA, Helton MJ, Howatt DA et al (2005)Aldosterone does not mediate angioII-induced atherosclerosis and abdominalaortic aneurysms. Br J Pharmacol 144:443–448

4. Daugherty A, Manning MW, Cassis LA(2000)Angiotensin II promotes atherosclerotic lesions and aneurysms inapolipoprotein E-deficient mice. J Clin Invest 105:1605–1612

5. Rateri DL, Moorleghen JJ, Balakrishnan A et al(2011) Endothelial cell-specific deficiency of Ang II type 1a receptorsattenuates Ang II-induced ascending aortic aneurysms in LDL receptor?/? mice. Circ Res 108:574–581

6. Thomas M, Gavrila D, Mccormick ML et al (2006)Deletion of p47phox attenuates angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysmformation in apolipoprotein E-deficient mice. Circulation 114:404–413

7. Zhang X, Thatcher SE, Rateri DL et al (2012)Transient exposure of neonatal female mice to testosterone abrogates the sexualdimorphism of abdominal aortic aneurysms. Circ Res 110:e73–e85

8. Liu S, Xie Z, Daugherty A et al (2013)Mineralocorticoid receptor agonists induce mouse aortic aneurysm formation andrupture in the presence of high salt. Arterioscler Thromb Vasc Biol33:1568–1579

9. Weber KT (2001) Aldosterone in congestive heartfailure. N Engl J Med 345:1689–1697

10. He BJ, Joiner ML, Singh MV et al (2011) Oxidationof CaMKII determines the cardio

toxic effects of aldosterone. Nat Med 17:1610–1618