本模型不涉及除遺傳物質(zhì)重組對(duì)環(huán)境生態(tài)影響以外的其它安全性問(wèn)題，本模型小鼠的保存、使用和處理均按照研究所倫理和安全委員會(huì)的要求執(zhí)行，可以確保不產(chǎn)生安全性問(wèn)題。

1、基因鑒定信息

2 、免疫熒光染色

敲除腸上皮STAT5基因?qū)е履c道干細(xì)胞減少

Western結(jié)果顯示STAT5基因敲除導(dǎo)致腸道干細(xì)胞減少

通過(guò)FACS分析敲除STAT5基因后干細(xì)胞數(shù)目明顯減少，細(xì)胞增殖減少，模型建立成功。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：Stat5 flox小鼠，Villin-CreERT2小鼠

試劑：tamoxifen(50mg/kg)，4%PFA

儀器：冰凍切片機(jī)，leica DMI8活細(xì)胞項(xiàng)目合作單位

實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程：將Stat5 flox小鼠與Villin-CreERT2小鼠雜交，在小鼠4周齡時(shí)，提取雜交小鼠鼠尾DNA，通過(guò)凝膠電泳檢測(cè)小鼠基因型。STAT5基因PCR引物序列如下1. GAA AGC ATG AAA GGG TTG GAG 2.AGC AGC AAC CAG AGG ACT AC 3.AAG TTA TCT CGA GTT AGT CAG G,Villin-CreERT2基因PCR引物序列如下:1 GTG TGG GAC AGA CAA ACC 2.ACATCT TCA GGT TCT GCG GG。選取雙陽(yáng)性小鼠，6~8周齡，體重20~22g。按每只小鼠連續(xù)5天按50mg/ kg腹腔注射他莫西芬。誘導(dǎo)后CO2麻醉處死小鼠，取腸道組織，用冷PBS沖洗腸道組織，置于4%多聚甲醛中固定過(guò)夜，1×PBS溶液里浸泡5min。制作冰凍切片及石蠟切片，免疫組化及免疫熒光染色觀察腸道干細(xì)胞的變化。

1. STAT基因（細(xì)胞/基因/病原/其他造模因素）信息

STAT(信號(hào)轉(zhuǎn)換器和轉(zhuǎn)錄激活因子)轉(zhuǎn)錄因子家族由STAT 1、3、4和5幾種蛋白質(zhì)組成。Janus激酶(JAK)/STAT信號(hào)通路與多種癌癥如卵巢癌、橫紋肌肉瘤、骨肉瘤和結(jié)腸癌相關(guān)。配體結(jié)合啟動(dòng)激活級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致STAT蛋白的磷酸化。磷酸化使STATs從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核并具有轉(zhuǎn)錄活性。STAT蛋白的關(guān)鍵激活因子是干擾素、白細(xì)胞介素等細(xì)胞因子，以及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF) b等生長(zhǎng)因子或癌基因等。

Stat5是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化蛋白家族的重要成員，參與了Jak/Stat信號(hào)通路調(diào)控。Stat5能夠影響細(xì)胞的增值/分化、存活與凋亡，并且在乳腺癌發(fā)育、免疫應(yīng)答干細(xì)胞自我更新調(diào)控、造血作用以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。

2. 研究背景

在哺乳動(dòng)物體內(nèi)，小腸組織是自我更新速度最快的組織之一。整個(gè)小腸黏膜大概每3~5d更新一次，主要依賴(lài)于小腸干細(xì)胞的增殖與分化。研究證實(shí)Ascl2、Olfm4、Bmi-1、Hopx等為小腸干細(xì)胞的標(biāo)志基因。在這些標(biāo)記基因中，Lgr5被認(rèn)為是最重要的。從功能上分析，Lgr5編碼G蛋白偶聯(lián)受體，在Wnt信號(hào)通路中起著重要的作用。從數(shù)量上看，Lgr5+干細(xì)胞增殖活躍，具有自我更新的潛能，在所有隱窩的底部均大量存在，以維持小腸上皮的穩(wěn)態(tài)。細(xì)胞因子- stat5信號(hào)通路調(diào)控可以調(diào)控腸上皮的穩(wěn)態(tài)和損傷反應(yīng)。我們通過(guò)特異性敲除腸道上皮細(xì)胞中的STAT5轉(zhuǎn)錄因子將STAT5信號(hào)通路與IESC的增殖分化聯(lián)系起來(lái)。