采用病毒滴度為104.5 TCID50/ml的EV71（NX10-147）經(jīng)腹腔注射感染9日齡BALB/c乳鼠，建立重癥小鼠模型，6 dpi重癥模型小鼠發(fā)生后肢癱瘓最終導(dǎo)致死亡；繪制生存率（圖1A），體重增長曲線（圖1B），臨床評分（圖1C）。重癥小鼠模型在5 dpi時，2/7(28.57%)小鼠發(fā)生后肢癱瘓（圖2），在7 dpi時，4/7(57.14%)小鼠表現(xiàn)癱瘓，其體重也下降，11~12 dpi重癥小鼠出現(xiàn)死亡，生存率為71.43%(5/7)，其中存活的小鼠中60%(3/5)出現(xiàn)癱瘓后遺癥。

圖1. EV71毒株（NX10-147）104.5 TCID50經(jīng)腹腔注射感染乳鼠建立重癥小鼠模型的生存率、體重、臨床評分

A.生存率; B. 體重; C. 臨床評分

圖2. 重癥EV71小鼠模型主要癥狀

1.重癥小鼠模型各組織病毒載量檢測

為了進(jìn)一步探討重癥EV71小鼠模型體內(nèi)病毒載量情況，采用RT-PCR對3 dpi和5 dpi重癥小鼠腦、脊髓、骨骼肌、空腸和肺組織進(jìn)行病毒核酸檢測（圖3），發(fā)現(xiàn)以上各組織在3 dpi和5 dpi 均檢測到EV71病毒，其中，檢測到重癥模型3 dpi骨骼肌中的高病毒載量（107.0 copies/mg），其中，3 dpi 在重癥模型腦組織中均檢測到低病毒載量(102.0 copies/mg)，5 dpi腦組織中病毒載量增加到104.0 copies/mg，說明5 dpi EV71病毒造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染加重。3 dpi在重癥模型脊髓、空腸和肺組織中的病毒載量104.0 copies/mg，5 dpi 病毒載量無明顯變化，重癥小鼠模型中均檢測到骨骼肌和脊髓中較高的病毒載量，說明這些組織是病毒復(fù)制并傳播到腦組織的重要部位。

圖3. EV71毒株（NX10-147）104.5 TCID50經(jīng)腹腔注射感染乳鼠建立重癥小鼠模型的組織內(nèi)病毒載量

2.重癥小鼠模型組織病理學(xué)變化

運(yùn)用組織病理學(xué)和免疫組織化學(xué)技術(shù)，對重癥小鼠模型的各組織器官進(jìn)行病理學(xué)觀察。空白對照組小鼠未見明顯病理變化，并且EV71抗原呈陰性反應(yīng)。

對重癥小鼠模型（NX10-147）進(jìn)行組織病理學(xué)觀察（圖4），發(fā)現(xiàn)3 dpi和5 dpi 小鼠后肢骨骼肌發(fā)生嚴(yán)重的壞死性肌炎，肌纖維斷裂，大量炎性細(xì)胞浸潤，主要有淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞；3 dpi 小鼠脊髓和腦干發(fā)生細(xì)胞源性水腫，神經(jīng)元發(fā)生變性，偶見壞死，5 dpi小鼠脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元變性壞死，出現(xiàn)紅色神經(jīng)元，并可見衛(wèi)星現(xiàn)象和嗜神經(jīng)現(xiàn)象，腦干組織中的神經(jīng)元發(fā)生不同程度的變性壞死，并且可見腦干和脊髓神經(jīng)元中的尼氏小體消失；5 dpi肺臟發(fā)生大面積間質(zhì)性肺炎，間質(zhì)增寬，炎性細(xì)胞浸潤，肺泡間隔毛細(xì)血管淤血，3 dpi和5 dpi肺臟發(fā)生局灶性肺氣腫；3 dpi和5 dpi空腸黏膜上皮細(xì)胞發(fā)生大面積空泡變性。免疫組織化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)在上述嚴(yán)重病變的組織中可觀察到EV71特異性抗原分布（圖5），在3dpi和5 dpi時，脊髓、腦干、空腸和骨骼肌檢測到較強(qiáng)的陽性EV71抗原信號，提示在這些組織中病毒復(fù)制活躍，然而在5 dpi時，肺臟檢測到中等強(qiáng)度陽性EV71抗原信號。

圖 4. 重癥小鼠模型各組織的組織病理學(xué)檢測

圖注：9日齡BALB/c乳鼠腹腔注射104.5 TCID50 EV71毒株（NX10-147），3dpi和5dpi解剖取材，圖片顯示各組別的典型組織照片（×200），箭頭指示5dpi各組織典型病理變化，對照組小鼠組織未見明顯病理變化。

圖5. 免疫組織化學(xué)方法檢測重癥小鼠模型各組織中的EV71VP2蛋白

圖注：重癥小鼠的骨骼肌、脊髓、腦干、肺以及空腸組織中可檢測到陽性EV71抗原（棕黃色顆粒）（×200），在空白對照組的上述組織中未見陽性EV71抗原。

3.重癥小鼠模型血清細(xì)胞因子檢測

對重癥小鼠模型進(jìn)行血清細(xì)胞因子檢測從血清細(xì)胞因子方面揭示重癥發(fā)生機(jī)制。本研究采用CBA方法檢測了重癥小鼠的3、6、12 hpi 以及1、2、3、5、7、9 dpi的血清細(xì)胞因子IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、TNF-α、IFN-γ，以及MCP-1、CCL5/RANTES的動態(tài)變化（圖6）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這些血清因子中，IL-5、IL-13、IL-6、MCP-1、CCL5、TNF-α在重癥小鼠中發(fā)生某時間點(diǎn)的爆發(fā)性濃度增高，與空白對照組小鼠血清因子相比，發(fā)現(xiàn)重癥小鼠血清爆發(fā)性增高的細(xì)胞因子分別是3 hpi重癥IL-5上調(diào)4倍；48 hpi重癥IL-13上調(diào)1.2倍；3 dpi重癥IL-6、MCP-1都上調(diào)100倍以上；3 dpi和7 dpi重癥CCL5/RANTES分別上調(diào)9倍和10倍；重癥小鼠模型中的IFN-γ在5 dpi時達(dá)到峰值，重癥為10倍；7 dpi重癥TNF-α和MCP-1分別上調(diào)4倍和87倍。以上數(shù)據(jù)說明，IL-5和IL-13可能是EV71小鼠實(shí)驗(yàn)感染早期炎癥反應(yīng)的主要因素，并且細(xì)胞因子IL-6、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、CCL5/RANTES在重癥EV71實(shí)驗(yàn)感染的免疫病理損傷中發(fā)揮重要作用。

圖6. 動態(tài)檢測重癥小鼠血清中的炎性細(xì)胞因子變化

圖注：流式細(xì)胞小球微陣列術(shù)（CBA）檢測血清中細(xì)胞因子濃度變化：A.IL-5; B. IL-13; C. IL-6; D. MCP-1; E. CCL5/RANTES; F. TNF-α; G. IFN-γ. 感染后出現(xiàn)因子濃度變化倍數(shù)比較顯示在圖H中。

4. EV71重癥小鼠模型的氣道阻力和血?dú)夥治?/p>

對小鼠的氣道阻力進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)小鼠的吸氣時間延長，呼吸頻率降低，分鐘通氣量顯著降低（圖7），符合限制性通氣不足的特征，可能是小鼠死亡的主要原因之一。

采用血?dú)夥治龇椒▽V71重癥小鼠模型組和對照組小鼠的呼吸效果進(jìn)行分析，與對照組相比，4 dpi感染組小鼠的氧分壓（PO2）和氧飽和度（sO2）均明顯下降，PO2 由62.2 mmHg下降到 46.75 mmHg，差異極顯著（p < 0.01）（圖8A）；sO2由90.6 %下降到76.5 %，差異極顯著（p< 0.01）（圖8B），PO2和sO2的變化提示EV71重癥模型組小鼠處于缺氧狀態(tài)。并且發(fā)現(xiàn)二氧化碳分壓（PCO2）和二氧化碳總量（TCO2）有所上升，PCO2由27.22 mmHg增加到46.25 mmHg，差異顯著（p< 0.05）（圖8D）；TCO2由24.00 mmol/L 增加到25.75 mmol/L（圖8E），PCO2的變化提示EV71重癥模型組小鼠肺通氣效果可能存在障礙。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)了血液酸堿度pH值和細(xì)胞外液堿剩余（BEecf）均明顯下降，pH值由7.42下降到7.33，差異顯著（p< 0.05）（圖8C）；BEecf由1 mmol/L降低到–2.25 mmol/L，差異顯著（p < 0.05）（圖8F），提示重癥模型組小鼠可能處于呼吸性酸中毒的狀態(tài)。以上血?dú)饨Y(jié)果結(jié)合肺臟組織病理變化，說明EV71重癥模型組小鼠肺臟通氣功能低下，處于缺氧和呼吸性酸中毒的病理狀態(tài)。

圖7.重癥EV71小鼠模型的氣道阻力分析

圖8. EV71感染小鼠導(dǎo)致血液各項(xiàng)指標(biāo)變化。

圖注：4 dpi模型組和對照組小鼠血液中的(A) 氧分壓PO2,(B) 氧飽和度sO2,(C)pH值,(D) 二氧化碳分壓PCO2,(E) 二氧化碳總量TCO2,(F) 細(xì)胞外液堿剩余BEecf指標(biāo)檢測。

5. EV71小鼠模型超微病理學(xué)變化

對照組小鼠肌肉組織可見橫紋明顯，每條肌原纖維都可見清晰明帶和暗帶交替排列，肌質(zhì)內(nèi)含有豐富的線粒體、肌原纖維、高爾基復(fù)合體、溶酶體、糖原顆粒等肌漿內(nèi)含物，糖原顆粒散在分布于肌原纖維間和肌漿中（圖9A），肌細(xì)胞內(nèi)可見清晰的線粒體，或在肌纖維間排列，其內(nèi)外膜和嵴突結(jié)構(gòu)清晰可見（圖9B）。感染組小鼠肌肉組織超微病變明顯，表現(xiàn)為肌組織橫紋消失，明暗帶模糊甚至消失，肌組織發(fā)生退行性變，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)水腫，部分肌原纖維發(fā)生溶解，肌質(zhì)中的胞漿內(nèi)容物減少，糖原顆粒甚至消失（圖9C）；線粒體腫脹、空化，基質(zhì)電子密度降低，內(nèi)室腫脹，嵴和膜結(jié)構(gòu)模糊，嵴突變短減少，崩解消失，形成灶性空化（圖9D）；骨骼肌細(xì)胞核固縮，染色質(zhì)邊集，異染色質(zhì)明顯增多，發(fā)生變性、壞死。并且在肌纖維間可見巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤。

對照組腦組織中神經(jīng)元胞漿中的細(xì)胞器豐富，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)達(dá)，平行或不規(guī)則排列，其間游離存在核糖體（圖10A）；線粒體豐富，散布于整個胞體中，線粒體內(nèi)外膜和嵴突結(jié)構(gòu)清晰（圖10B）；腦組織中有髓神經(jīng)纖維髓鞘電子密度均勻（圖10C）。感染組腦組織超微病變輕微，神經(jīng)元細(xì)胞器豐富，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)達(dá)，線粒體豐富（圖10D）；神經(jīng)元胞漿中可見少量空泡，部分線粒體內(nèi)室腫脹(圖10E)；有髓神經(jīng)纖維髓鞘發(fā)生層面分離，導(dǎo)致小泡性分離，呈現(xiàn)泡狀改變（圖10F）。

對照組脊髓前角神經(jīng)元常染色質(zhì)明顯，異染色質(zhì)少，細(xì)胞器豐富（圖11A）；脊髓前角神經(jīng)元胞質(zhì)中線粒體豐富，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)達(dá)（圖11B）。感染組脊髓前角神經(jīng)元中粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，出現(xiàn)尼氏小體溶解，核周見微空泡形成；胞核皺縮，異染色質(zhì)增多，細(xì)胞器減少，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體呈現(xiàn)不同程度的擴(kuò)張，細(xì)胞質(zhì)呈篩狀外觀，并伴隨不同程度的多聚核糖體丟失，導(dǎo)致粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒；線粒體腫脹，線粒體嵴突腫脹，嵴數(shù)量減少（圖11C）。小膠質(zhì)細(xì)胞包圍吞噬神經(jīng)元細(xì)胞，呈現(xiàn)嗜神經(jīng)現(xiàn)象（圖11D）。

對照組肺組織中I型上皮細(xì)胞扁平，其細(xì)胞核內(nèi)可見呈淺亮的常染色質(zhì)和呈深色顆粒狀的異染色質(zhì)，胞質(zhì)少而薄，胞漿內(nèi)可見少量細(xì)胞器，與周圍細(xì)胞連接緊密（圖12A）；肺組織中的II型上皮細(xì)胞核大而圓，常染色質(zhì)細(xì)密，異染色質(zhì)少，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、溶酶體等細(xì)胞器豐富（圖12B）；II型上皮細(xì)胞胞漿中可見清晰的特征性包含物——嗜鋨性板層小體（圖12C）。感染組肺組織中I型上皮細(xì)胞核中染色質(zhì)邊集，呈不規(guī)則堆積，并且與周圍細(xì)胞之間連接松弛（圖12D）；肺組織中II型上皮細(xì)胞核形狀不規(guī)則，染色質(zhì)邊集，核周細(xì)胞質(zhì)電子密度降低，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體、高爾基復(fù)合體等細(xì)胞器減少，胞質(zhì)出現(xiàn)細(xì)小空泡變（圖12E），嗜鋨性板層小體或出現(xiàn)排空現(xiàn)象，溶酶體增多（圖12F）；肺泡壁中的細(xì)胞成分增多，其中肺泡II型上皮細(xì)胞增生，發(fā)生了間質(zhì)性肺炎。

圖9. 骨骼肌的超微病理變化

圖注：A.對照組肌組織橫紋明顯，每條肌原纖維都可見清晰明帶和暗帶交替排列；B.對照組肌細(xì)胞胞漿內(nèi)可見線粒體內(nèi)外膜和嵴突結(jié)構(gòu)清晰；C.感染組肌肉橫紋消失，肌原纖維溶解，線粒體腫脹、空泡化；D.感染組肌組織線粒體腫脹，表現(xiàn)為內(nèi)室腫脹，嵴和膜結(jié)構(gòu)模糊。

圖10. 腦組織的超微病理變化

圖注：A.對照組腦組織神經(jīng)元細(xì)胞器豐富，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)達(dá)，線粒體豐富；B.對照組腦組織神經(jīng)元中線粒體內(nèi)外膜和嵴突結(jié)構(gòu)清晰；C.對照組腦組織中有髓神經(jīng)纖維髓鞘電子密度均勻；D.感染組腦組織神經(jīng)元細(xì)胞器豐富，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)達(dá)，線粒體豐富；E.感染組腦組織神經(jīng)元胞漿中可見少量空泡，部分線粒體內(nèi)室腫脹；F.感染組腦組織中有髓神經(jīng)纖維髓鞘發(fā)生小泡性分離，呈現(xiàn)泡狀改變。

圖11. 脊髓的超微病理變化

圖注：A.對照組脊髓前角神經(jīng)元常染色質(zhì)明顯，異染色質(zhì)少，細(xì)胞器豐富；B.對照組脊髓前角神經(jīng)元胞質(zhì)中線粒體豐富，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)達(dá)；C.感染組脊髓前角神經(jīng)元中線粒體腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，脫顆粒，尼氏小體消失，核周見微空泡形成；D.感染組中小膠質(zhì)細(xì)胞包圍吞噬脊髓前角神經(jīng)元，呈現(xiàn)嗜神經(jīng)現(xiàn)象。

圖12. 肺臟的超微病理變化

圖注：A.對照組肺組織中 I型上皮細(xì)胞扁平，可見常染色質(zhì)和異染色質(zhì)，可見少量細(xì)胞器；B.對照組肺組織中II型上皮細(xì)胞核大而圓，常染色質(zhì)細(xì)密，異染色質(zhì)少，細(xì)胞器豐富；C.對照組肺組織中可見清晰的嗜鋨性半層小體；D.感染組肺組織中I型上皮細(xì)胞核中染色質(zhì)邊集，呈不規(guī)則堆積，與周圍細(xì)胞之間連接松弛；E.感染組肺組織中II型上皮細(xì)胞核形狀不規(guī)則，染色質(zhì)邊集，細(xì)胞器減少；F.感染組肺組織中的II型上皮細(xì)胞胞質(zhì)細(xì)小空泡變，嗜鋨性板層小體排空，溶酶體增生。

H1PV為低于人間傳染病名錄三級安全風(fēng)險的病原，人類感染風(fēng)險低。

H1PV是大鼠必須排除的病原體，對動物有致病性。會干擾其他實(shí)驗(yàn)研究。

鑒于此，此感染實(shí)驗(yàn)必須在BSL-2級以上的生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原學(xué)實(shí)驗(yàn)，在ABSL-2實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)。

1. 轉(zhuǎn)基因小鼠鑒定

人PSGl-1轉(zhuǎn)基因小鼠經(jīng)RT-PCR和Western blotting鑒定，表明人PSGL-1蛋白主要在小鼠的骨骼肌和腦中表達(dá)，可檢測到該基因的mRNA表達(dá)及蛋白（圖1）。

2. 動物癥狀

EV71 MP10感染轉(zhuǎn)基因小鼠后，動物自感染后第3天開始出現(xiàn)癥狀，表現(xiàn)為體重增長變緩、弓背豎毛、后肢行動遲緩至癱瘓、死亡等癥狀。感染后第4天時，動物全部表現(xiàn)出后肢癱瘓、停止進(jìn)食等癥狀，感染后第5天動物開始出現(xiàn)死亡，在10天內(nèi)全部死亡，該特征類似于EV71重癥感染小鼠模型。實(shí)時熒光定量PCR檢測表明病毒主要復(fù)制部位為骨骼肌和腦，病毒在感染后第3天達(dá)到高峰，主要病理表現(xiàn)為壞死性肌炎。

圖1. 人PSGL-1轉(zhuǎn)基因小鼠鑒定.A，人PSGL-1基因設(shè)計(jì)；B，轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定；C，骨骼肌和腦內(nèi)人PSGL-1基因的mRNA檢測；D，Westernblotting檢測骨骼肌和腦內(nèi)人PSGL-1蛋白表達(dá)檢測。

3. 轉(zhuǎn)基因小鼠與野生小鼠模型的區(qū)別

制作人PSGL-1轉(zhuǎn)基因小鼠的主要目的，是驗(yàn)證表達(dá)人PSGL-1蛋白能否提高小鼠對EV71的敏感性，因此，可通過EV71的臨床分離株和小鼠適應(yīng)株來分別測驗(yàn)人PSGL-1對EV71感染的促進(jìn)效果。

圖2. EV71臨床分離株JK2009感染人PSGL-1轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠后，病毒在骨骼肌中的復(fù)制曲線?！褚吧托∈?；○轉(zhuǎn)基因小鼠。

EV71的臨床分離株JK2009感染小鼠后，分別在第1天、3天和5天分離骨骼肌，檢測病毒載量，發(fā)現(xiàn)與野生型小鼠相比，轉(zhuǎn)基因小鼠骨骼肌內(nèi)的病毒載量并沒有顯著提高（圖2）。

圖3. EV71的小鼠適應(yīng)株MP10感染轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠. A-C，組織內(nèi)病毒載量，A（骨骼肌），B（脊髓），C（腦）；D，臨床癥狀評分的變化曲線；E，感染第3天和第5天時的小鼠狀態(tài)照片。

EV71的小鼠適應(yīng)株MP10感染小鼠后，在第3天時，轉(zhuǎn)基因小鼠的骨骼肌、脊髓和腦內(nèi)的病毒載量顯著高于野生型小鼠（圖3A-C），但是在第5天時，該差別不再明顯，表明表達(dá)人PSGL-1蛋白可以一過性的促進(jìn)EV71小鼠適應(yīng)株感染小鼠。與病毒復(fù)制相一致，第3天轉(zhuǎn)基因小鼠的后肢出現(xiàn)雙側(cè)癱瘓，癥狀明顯比野生型小鼠嚴(yán)重，但在第5天時癥狀類似（圖3D-E）。提高病毒的感染劑量，并不能使兩周以上的轉(zhuǎn)基因小鼠表現(xiàn)出明顯的癥狀，表明人PSGL-1具有一定的促進(jìn)EV71感染效果。

背景品系：C57BL/6J,表達(dá)人PSGL-1蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠，動物品系名稱為：C57BL/6J-TgN(CMV-Homo-PSGL-1)-ZLFILAS。

轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建

以人PSGL-1的mRNA為模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄獲得人PSGL-1的cDNA，將其插入pCDNA3.1(+)載體的啟動子下游，構(gòu)建轉(zhuǎn)基因載體。載體經(jīng)測序驗(yàn)證正確后，將其線性化并經(jīng)顯微注射到C57BL/6J的受精卵中，用129做假孕受體，制備轉(zhuǎn)基因小鼠。轉(zhuǎn)基因小鼠提取鼠尾DNA進(jìn)行基因鑒定（h-PSGL-F: 5’-CTACCAAAAGAGGTCTGTTC-3’；h-PSGL-R:5’-ATGAGATGCAGACCATCTCG-3’），采用RT-PCR法檢測組織內(nèi)基因表達(dá)情況（h-PSGL-CF: 5’-GTGGTGCTGGCGGTCCG-3’；h-PSGL-CR: 5’-CAGGCCCCCATTGGCTGTG-3’），并用兔抗人PSGL-1的多克隆抗體檢測組織內(nèi)蛋白表達(dá)情況。

1. 病毒制備

使用的臨床分離株包括：1.FY0805a，2008年分離自安徽省阜陽市，GenBank存儲號為HQ882182；2.JK2009,2009年分離自重慶市，GenBank存儲號為HQ694982；使用的小鼠適應(yīng)株為MP10，為FY0805a在小鼠體內(nèi)連續(xù)傳代10次后的小鼠適應(yīng)株，GenBank存儲號為HQ712020。EV71在人橫紋肌瘤細(xì)胞（RD）中培養(yǎng)、繁殖，采用三次凍融法釋放病毒，超速離心法富集病毒，病毒儲存于超低溫冰箱中，病毒儲存液濃度為1×109 TCID50/ml。

2. 實(shí)驗(yàn)動物

可使用SPF級別的10日齡乳鼠，品系為C57BL/6J-TgN(CMV-Homo-PSGL-1) -ZLFILAS，母鼠自然哺乳，在動物生物安全二級實(shí)驗(yàn)室內(nèi)獨(dú)立飼養(yǎng)。

3. 病毒感染

根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定感染劑量，10日齡乳鼠經(jīng)輕度麻醉后，經(jīng)腹腔注射1×108 TCID50 的EV71JK2009,攻毒體積為100微升/只；小鼠適應(yīng)株EV71 MP10的感染劑量為5×106 TCID50，注射體積為100微升/只，空白對照組注射等量RD細(xì)胞上清。

手足口病是腸道病毒引起的傳染性、出疹性疾病，該病多發(fā)生于5歲以下的嬰幼兒，可引起發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹、潰瘍，個別手足口病患者可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等并發(fā)癥，而神經(jīng)源性肺水腫、肺出血和心力衰竭被認(rèn)為是導(dǎo)致死亡的主要原因。

引發(fā)手足口病的腸道病毒有20多種，包括柯薩奇病毒A組和B組、人腸道病毒71型（EV71）以及皰疹病毒、腺病毒等，其中以柯薩奇病毒A16型(CA16)和腸道病毒71型（EV71）最為常見。而絕大多數(shù)重癥手足口病病例，均由EV71或CA16病毒感染所致。

EV71屬于微小RNA病毒科，腸道病毒屬，主要通過糞口傳播，病毒最初定植于鼻咽部或胃腸道粘膜，侵入淋巴組織并在其中繁殖，進(jìn)而引起第一次病毒血癥。若機(jī)體免疫力差，病毒可擴(kuò)散至全身組織器官，大量繁殖后再次入血，引起第二次病毒血癥，最終侵犯靶器官，如腦、腦膜、脊髓、心肌和橫紋肌以及皮膚黏膜組織，引起重癥病變，尸檢時主要病變?yōu)樯窠?jīng)元壞死等。

日本學(xué)者指出PSGL-1蛋白是人的EV71病毒受體，在小鼠細(xì)胞內(nèi)表達(dá)人PSGL-1蛋白可以提高小鼠細(xì)胞對EV71的敏感性。建立骨骼肌和神經(jīng)組織表達(dá)人PSGL-1蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠，可提高小鼠對病毒的敏感性，有望提高敏感小鼠的年齡，從而建立成年的EV71感染模型。