到目前為止，已經(jīng)報(bào)道有2種非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物（恒河猴、食蟹猴）和4種嚙齒類動(dòng)物（大鼠、小鼠、田鼠、沙鼠），雪貂、家貓以及雞、鴨等禽類可以作為H5N1禽流感病毒動(dòng)物模型用于實(shí)驗(yàn)研究。低致病性H5N1禽流感病毒可以通過(guò)適應(yīng)建立鼠肺適應(yīng)株感染小鼠建立小鼠模型。非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物通過(guò)鼻腔吸入較難感染，通常需要借助輔助器材進(jìn)行定位感染，動(dòng)物感染后體征變化不顯著，肺組織出現(xiàn)局灶性病變。

前期研究顯示雪貂的受體分布情況與人極為接近，呼吸氣道長(zhǎng)，上下呼吸道分腔明顯是流感病毒研究最為理想的動(dòng)物模型，缺點(diǎn)是雪貂受物種特異性限制缺乏相應(yīng)的檢測(cè)試劑。小鼠對(duì)多種流感病毒敏感，一直被選擇作為流感病毒研究的動(dòng)物模型，不僅有完備的檢測(cè)試劑，還有相應(yīng)的基因敲除、轉(zhuǎn)基因小鼠可用于機(jī)制方面的研究。早期研究曾在多種非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物中（非洲綠猴、Pata猴、豬尾猴、食蟹猴）檢測(cè)到血清抗體陽(yáng)性，并推測(cè)猴群感染病毒參與了流感大流行。研究發(fā)現(xiàn)非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物感染禽流感病毒后的臨床改變、病理變化、抗原分布都與人類存在一定差異，研究結(jié)果顯示其對(duì)流感病毒敏感性較雪貂、小鼠低。至今沒(méi)有直接證據(jù)表明非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物的受體分布情況與人接近。恒河猴中研究局部肺組織損傷機(jī)制不僅與巨噬細(xì)胞有關(guān)，在研究抗補(bǔ)體機(jī)制中還應(yīng)考慮PAMP的參與，NF-κB 等炎癥信號(hào)途徑的作用，這些研究在非人靈長(zhǎng)類中受到一定限制，目前小鼠可以提供多方面抗補(bǔ)體機(jī)制研究。

1 受體比較

1) 人呼吸道上皮受體分布情況：α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體主要分布在鼻粘膜上皮細(xì)胞, α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體分布在鼻旁竇、咽、氣管、細(xì)支氣管上皮上。在終端呼吸性細(xì)支氣管上皮細(xì)胞也表達(dá)α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體。α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體出現(xiàn)在呼吸細(xì)支氣管與肺泡交界的無(wú)纖毛立方細(xì)支氣管細(xì)胞上，部分肺泡壁細(xì)胞表達(dá)這種受體，這種細(xì)胞為肺泡Ⅱ型細(xì)胞。病人感染H5N1禽流感病毒后，病毒主要分布在肺泡Ⅱ型細(xì)胞內(nèi)。

2) 雪貂除了氣管中極少數(shù)杯狀細(xì)胞既表達(dá)α-2，3SA受體又α-2，6SA受體，其上下呼吸道受體分布與人極為相似，小鼠多表達(dá)α-2，3SA受體，α-2，6SA受體較少，曾局限的認(rèn)為小鼠較適合用于α-2，3SA受體結(jié)合的病毒研究，后有研究發(fā)現(xiàn)受體特異性并不影響某些病毒對(duì)小鼠的致病力和復(fù)制能力。

3)有研究顯示通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)非洲綠猴上皮細(xì)胞與人類流感病毒和禽類流感病毒都有較好的結(jié)合能力，與人類上皮細(xì)胞的結(jié)合能力接近。缺乏實(shí)驗(yàn)證據(jù)顯示其受體與人類受體分布相似度。

2 感染途徑比較

1) 小鼠、雪貂通過(guò)輕微麻醉后，以吸入式方式感染，感染方式與人極為接近。

2) 恒河猴、綠猴、食蟹猴等需要以環(huán)甲膜穿刺、支氣管鏡定位感染等方式進(jìn)行感染，感染途徑與自然感染途徑差別較大，感染效果通常會(huì)出現(xiàn)肺組織局域性灶狀感染，與吸入性感染方式產(chǎn)生的病變程度、范圍存在一定差別。

3 感染后癥狀

1) 部分禽流感病毒在猴上皮細(xì)胞中復(fù)制受限或者發(fā)生不同程度的衰減。例如禽來(lái)源的H2N2病毒不能感染猴，H5N1高致病性禽流感病毒需要以高出雪貂感染劑量103倍的劑量感染猴，仍不致死，僅產(chǎn)生一過(guò)性體溫升高。

2) 幾乎所有禽流感病毒都能夠在雪貂中成功復(fù)制，并產(chǎn)生臨床可觀察的改變，例如體溫升高、體重下降、噴嚏、流涕、精神萎靡甚至死亡。

3)H5N1禽流感病毒感染小鼠后出現(xiàn)嚴(yán)重的肺炎，除呼吸道以外還在腦、脾、肝等組織中發(fā)現(xiàn)病毒抗原，并在腦組織中出病理改變，猴感染后在呼吸道以外的組織中未發(fā)現(xiàn)病毒抗原。

1.雪貂臨床表現(xiàn)

兩組三只雪貂經(jīng)鼻內(nèi)接種104TCID50病毒：一組接種A/wildbird/HongKong/07035-1/2011病毒，另一組接種A/Vietnam /1194/2004病毒。觀察動(dòng)物的臨床體征，并每天稱重以。兩種病毒均使雪貂出現(xiàn)打噴嚏、聳毛、嗜睡和食欲下降。一只接種了A/Vietnam/1194/2004病毒的雪貂在接種病毒4天后死亡； A/wild bird /Hong Kong/ 07035-1/2011病毒感染的雪貂無(wú)死亡情況。攻毒后9天內(nèi)，接種A/wild bird/HongKong/07035-1/2011病毒的動(dòng)物體重下降峰值為10.3％，而接種A/Vietnam/1194/2004病毒的動(dòng)物體重下降峰值為27.8％（表1，圖1）。

表1 A/wild bird/HongKong/07035-1/2011感染雪貂的臨床癥狀和排毒情況

2. 雪貂排毒情況

對(duì)于這兩種病毒，從上呼吸道排出的病毒始于感染后第1天，一直持續(xù)到感染后第7天。使用鼻拭子檢測(cè)到的上呼吸道排毒水平，接種A/Vietnam/1194/2004病毒的動(dòng)物拭子中病毒滴度明顯高于接種A/wildbird/HongKong/07035-1/2011的動(dòng)物毒（P<0.01）。

兩種病毒都沒(méi)有通過(guò)呼吸道飛沫從接種的雪貂傳播到幼稚的雪貂。機(jī)載接觸組的雪貂的鼻拭子或咽拭子中均未檢測(cè)到病毒）

3. 傳播組雪貂血清中H5N1抗體水平

根據(jù)HI分析，接觸雪貂的恢復(fù)期血清（暴露后21天）對(duì)病毒特異性抗體陰性。

生物安全性

CRP基因敲除小鼠和人CRP轉(zhuǎn)基因小鼠在賽業(yè)（蘇州）生物科技有限公司模式動(dòng)物研究中心完成，該中心具有符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的動(dòng)物模型制備相關(guān)完備監(jiān)督管理制度。動(dòng)物的繁殖及感染模型評(píng)估在中國(guó)疾控中心動(dòng)物中心完成，所有操作在SFP級(jí)別下遵守二級(jí)生物安全管理規(guī)定進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尸體實(shí)行無(wú)害化處理，對(duì)生態(tài)環(huán)境無(wú)影響。

雪貂呼吸道解剖結(jié)構(gòu)上下呼吸道分腔明顯，受體分布與人極為接近，是迄今為止最為敏感的流感病毒感染動(dòng)物模型。它對(duì)人流感病毒高度易感，病毒不經(jīng)適應(yīng)即能使雪貂致病，并易傳播給雪貂和人。在自然條件下，雪貂一般也是通過(guò)呼吸道吸入病毒的方式感染流感病毒，其感染后的發(fā)病過(guò)程和機(jī)體反應(yīng)也與人體相似。雪貂除對(duì)人流感病毒高度易感外，對(duì)禽流感、豬流感病毒也十分敏感，且感染后出現(xiàn)典型癥狀。

病毒株為A/wildbird/Hong Kong/07035-1/2011和A/Vietnam/1194/2004禽流感病毒，經(jīng)血凝抑制（HI）實(shí)驗(yàn)，篩選出6月齡以下對(duì)當(dāng)下流行的H1N1、H3N2、H5N1、H7N9亞型流感病毒相應(yīng)血清抗體均為陰性的去勢(shì)雪貂。為了使動(dòng)物適應(yīng)并降低應(yīng)激反應(yīng)，所有雪貂均在感染前一周進(jìn)行體溫芯片的皮下植入和實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)（使用掃描儀監(jiān)測(cè)體溫，BMDS, USA）。感染組通過(guò)肌肉注射鹽酸塞拉嗪對(duì)雪貂進(jìn)行麻醉，輕度麻醉后感染組每只雪貂經(jīng)鼻接種病毒。傳播實(shí)驗(yàn)是在籠子中進(jìn)行的，該籠子旨在防止動(dòng)物之間的直接接觸，但允許已接種的雪貂與相鄰的幼稚雪貂之間保持氣流。兩組三只雪貂經(jīng)鼻內(nèi)接種104TCID50病毒400uL；一組接種了A/wild bird/HongKong/07035-1/2011病毒，另一組接種了A/Vietnam/1194/2004病毒。在感染后第24小時(shí)，將每只接種過(guò)的動(dòng)物和幼稚的雪貂分別飼養(yǎng)在傳播籠中，以測(cè)試病毒的傳播能力。觀察所有動(dòng)物的臨床體征，每天稱重作為疾病的指標(biāo)。分別在感染后第1、3、5、7和9天或暴露后從已接種和未接種過(guò)的動(dòng)物收集鼻拭子和咽拭子，并轉(zhuǎn)移至1 ml PBS中。通過(guò)在MDCK細(xì)胞中的終點(diǎn)滴定確定病毒滴度。

禽流感依據(jù)其對(duì)禽類的致病能力大小可以分為三個(gè)程度：高致病性、低致病性和無(wú)致病性。其中高致病性禽流感包括H5和H7 兩個(gè)亞型。但并非所有的H5 和H7 都是強(qiáng)毒株。人高致病性禽流感是由高致病性禽流感病毒某些亞型的毒株引起的人急性呼吸道傳染病。由H5N1亞型禽流感引起的癥狀較重，病死率高。1997年，香港一名3歲的男童因感染禽流感而死亡，在隨后的幾個(gè)月中，共有18個(gè)人感染禽流感病毒，其中6人死亡。之后相繼有 H9N2、H7N7亞型禽流感感染人類和 H5N1 亞型再次感染人類的報(bào)道,禽流感與人禽流感的關(guān)系開始倍受關(guān)注。2003年12 月中旬開始至今,朝鮮、越南、泰國(guó)、韓國(guó)、日本和中國(guó)等10 余個(gè)亞洲國(guó)家先后暴發(fā)H5N1高致病性禽流感疫情, 并且再越南、泰國(guó)、柬埔寨以及印度尼西亞出現(xiàn)了人感染高致病性禽流感病毒病例。據(jù)最新資料報(bào)道，世界衛(wèi)生組織已證實(shí)泰國(guó)、越南和柬埔寨以及印度尼西亞自2004年1月起截至到2005年8月20日共有112人感染，其中導(dǎo)致57人死亡。而H7N7感染引起的癥狀相對(duì)較輕僅以眼角結(jié)膜炎和輕微的呼吸道癥狀為主。追溯歷史，有報(bào)道的第一次禽流感感染人的事件發(fā)生在上個(gè)世紀(jì)的70-80年代的幾例以自限性結(jié)膜炎為臨床特征的H7N7感染病患。最近的一次發(fā)生在2003年荷蘭一家農(nóng)場(chǎng)有近80名工人及家屬被確診為H7N7感染,他們以眼部感染和呼吸道癥狀為主,其中一名獸醫(yī)死亡,他的家人未接觸病禽但也被證實(shí)H7N7感染。這起事件具有有限的人傳人的證據(jù)。

禽流感病毒感染患者臨床表現(xiàn)及致病機(jī)制

H5N1禽流感病毒感染的潛伏期一般為2～4天，平均3天。發(fā)病前1天就開始排毒，排毒時(shí)間兒童比成人長(zhǎng)，免疫抑制者排毒可長(zhǎng)達(dá)一個(gè)多月。臨床表現(xiàn)為急性起病，早期表現(xiàn)類似一般流感。主要為發(fā)熱，體溫大多持續(xù)在38℃以上，熱程1～7天，一般為3～4天，可伴有流涕、鼻塞、咳嗽、咽痛、頭痛和渾身不適。少數(shù)患者可有惡心、腹瀉、稀水樣便等癥狀。重癥患者病情發(fā)展迅速，可出現(xiàn)肺炎、急性呼吸窘迫綜合征、肺出血、胸腔積液、全血細(xì)胞減少，腎功能衰竭，敗血癥、休克及Reye綜合征等多種并發(fā)癥。