到目前為止，已經(jīng)報道有2種非人靈長類動物（恒河猴、食蟹猴）和4種嚙齒類動物（大鼠、小鼠、田鼠、沙鼠），雪貂、家貓以及雞、鴨等禽類可以作為H5N1禽流感病毒動物模型用于實驗研究。低致病性H5N1禽流感病毒可以通過適應(yīng)建立鼠肺適應(yīng)株感染小鼠建立小鼠模型。非人靈長類動物通過鼻腔吸入較難感染，通常需要借助輔助器材進行定位感染，動物感染后體征變化不顯著，肺組織出現(xiàn)局灶性病變。

前期研究顯示雪貂的受體分布情況與人極為接近，呼吸氣道長，上下呼吸道分腔明顯是流感病毒研究最為理想的動物模型，缺點是雪貂受物種特異性限制缺乏相應(yīng)的檢測試劑。小鼠對多種流感病毒敏感，一直被選擇作為流感病毒研究的動物模型，不僅有完備的檢測試劑，還有相應(yīng)的基因敲除、轉(zhuǎn)基因小鼠可用于機制方面的研究。早期研究曾在多種非人靈長類動物中（非洲綠猴、Pata猴、豬尾猴、食蟹猴）檢測到血清抗體陽性，并推測猴群感染病毒參與了流感大流行。研究發(fā)現(xiàn)非人靈長類動物感染禽流感病毒后的臨床改變、病理變化、抗原分布都與人類存在一定差異，研究結(jié)果顯示其對流感病毒敏感性較雪貂、小鼠低。至今沒有直接證據(jù)表明非人靈長類動物的受體分布情況與人接近。恒河猴中研究局部肺組織損傷機制不僅與巨噬細胞有關(guān)，在研究抗補體機制中還應(yīng)考慮PAMP的參與，NF-κB 等炎癥信號途徑的作用，這些研究在非人靈長類中受到一定限制，目前小鼠可以提供多方面抗補體機制研究。

受體比較

1) 人呼吸道上皮受體分布情況：α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體主要分布在鼻粘膜上皮細胞, α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體分布在鼻旁竇、咽、氣管、細支氣管上皮上。在終端呼吸性細支氣管上皮細胞也表達α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體。α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體出現(xiàn)在呼吸細支氣管與肺泡交界的無纖毛立方細支氣管細胞上，部分肺泡壁細胞表達這種受體，這種細胞為肺泡Ⅱ型細胞。病人感染H5N1禽流感病毒后，病毒主要分布在肺泡Ⅱ型細胞內(nèi)。

2) 雪貂除了氣管中極少數(shù)杯狀細胞既表達α-2，3SA受體又α-2，6SA受體，其上下呼吸道受體分布與人極為相似，小鼠多表達α-2，3SA受體，α-2，6SA受體較少，曾局限的認為小鼠較適合用于α-2，3SA受體結(jié)合的病毒研究，后有研究發(fā)現(xiàn)受體特異性并不影響某些病毒對小鼠的致病力和復制能力。

3)有研究顯示通過體外實驗證實非洲綠猴上皮細胞與人類流感病毒和禽類流感病毒都有較好的結(jié)合能力，與人類上皮細胞的結(jié)合能力接近。缺乏實驗證據(jù)顯示其受體與人類受體分布相似度。

6.2感染途徑比較

1) 小鼠、雪貂通過輕微麻醉后，以吸入式方式感染，感染方式與人極為接近。

2) 恒河猴、綠猴、食蟹猴等需要以環(huán)甲膜穿刺、支氣管鏡定位感染等方式進行感染，感染途徑與自然感染途徑差別較大，感染效果通常會出現(xiàn)肺組織局域性灶狀感染，與吸入性感染方式產(chǎn)生的病變程度、范圍存在一定差別。

感染后癥狀

1) 部分禽流感病毒在猴上皮細胞中復制受限或者發(fā)生不同程度的衰減。例如禽來源的H2N2病毒不能感染猴，H5N1高致病性禽流感病毒需要以高出雪貂感染劑量103倍的劑量感染猴，仍不致死，僅產(chǎn)生一過性體溫升高。

2) 幾乎所有禽流感病毒都能夠在雪貂中成功復制，并產(chǎn)生臨床可觀察的改變，例如體溫升高、體重下降、噴嚏、流涕、精神萎靡甚至死亡。

3)H5N1禽流感病毒感染小鼠后出現(xiàn)嚴重的肺炎，除呼吸道以外還在腦、脾、肝等組織中發(fā)現(xiàn)病毒抗原，并在腦組織中出病理改變，猴感染后在呼吸道以外的組織中未發(fā)現(xiàn)病毒抗原。

CRP基因敲除小鼠和人CRP轉(zhuǎn)基因小鼠在賽業(yè)（蘇州）生物科技有限公司模式動物研究中心完成，該中心具有符合國際標準的動物模型制備相關(guān)完備監(jiān)督管理制度。動物的繁殖及感染模型評估在中國疾控中心動物中心完成，所有操作在SFP級別下遵守二級生物安全管理規(guī)定進行，實驗動物尸體實行無害化處理，對生態(tài)環(huán)境無影響。

1. 雪貂模型感染后臨床癥狀變化

106 TCID50的H3N2病毒和107 TCID50的H3N2病毒感染雪貂的臨床癥狀相似，雪貂在感染后1天出現(xiàn)癥狀，主要表現(xiàn)為流涕、打噴嚏等上呼吸道感染的表現(xiàn)，伴有一定程度的活動度下降。根據(jù)其表現(xiàn)設(shè)立了評分標準：NIH提供的雪貂感染實驗觀察指標分為鼻部癥狀和活動度兩個部分，具體指標見表1。雪貂感染H3N2后的臨床癥狀評分所示。

雪貂感染H3N2病毒后出現(xiàn)體溫升高，106TCID50組在感染后第2天、第3天出現(xiàn)體溫升高，107TCID50組在感染后第2天出現(xiàn)體溫一過性升高（圖2）。雪貂感染H3N2后出現(xiàn)體重下降，106TCID50組由感染后第1天一直持續(xù)到實驗結(jié)束，107TCID50組在感染后第1天呈現(xiàn)體重下降，在感染后第4天到實驗結(jié)束體重開始回升。

2. 雪貂模型感染后病毒在組織中復制情況

感染后第5天安樂雪貂，取其肝、脾、肺、小腸、腦組織做病毒滴度測定。結(jié)果顯示肝、脾、肺、腦組織都未分到病毒，106TCID50組雪貂小腸組織的病毒在101.8-102.3TCID50之間，106TCID50組在101.8TCID50。以上的結(jié)果反映了H3N2病毒感染雪貂是主要以上呼吸道受到病毒感染為主，肺組織受到病毒感染的程度比較低。腸道組織的高病毒滴度從一定程度說明H3N2病毒可以感染呼吸道以外的組織臟器，并在其中復制。

3.雪貂模型感染后病毒在上呼吸道中動態(tài)復制情況

雪貂感染H3N2病毒后，每天取鼻甲骨活檢物做病毒滴度測定，結(jié)果顯示106TCID50組雪貂在感染后第2天就可以檢測到病毒，滴度為102.1TCID50，可一直持續(xù)至感染后第4天，但病毒滴度呈下降趨勢。雪貂感染107TCID50的病毒后鼻甲骨活檢物沒有檢測到病毒（表3），證實106TCID50是該H3N2毒株比較合適的感染雪貂劑量。

雪貂感染H3N2后，每天取鼻甲骨活檢物做病毒載量測定，結(jié)果顯示2個滴度組雪貂在感染后第1天至感染后第5天，上呼吸道排毒都呈下降趨勢，兩個劑量組的病毒載量結(jié)果無統(tǒng)計學顯著差異（圖4）。

4. 雪貂模型感染后肺組織病理檢測結(jié)果

感染5天后，雪貂安樂死解剖，大體觀察到肺組織背側(cè)面和腹側(cè)面有散在點狀出血灶，其他組織未見異常。鏡下觀察發(fā)現(xiàn)以肺組織輕度間質(zhì)性肺炎為主要表現(xiàn)，肺組織肺靜脈及肺泡壁毛細血管明顯擴張充血，部分肺靜脈壁及周圍組織明顯水腫，局部支氣管及肺泡上皮細胞壞死、脫落，肺泡腔內(nèi)可見滲出和漏出的紅細胞、水腫液、炎細胞及壞死脫落的上皮細胞碎屑。其他組織未見明顯異常，106TCID50組與107TCID50組肺組織病變無顯著性差異。

對照組動物的肺（A）、小腸（C）及感染組動物的小腸（D）均未見異常。感染組動物肺臟呈局灶性間質(zhì)性肺炎改變，局部肺間隔毛細血管擴張充血，炎細胞浸潤（B）。A、B、C、D：HE×100。

雪貂呼吸道解剖結(jié)構(gòu)上下呼吸道分腔明顯，受體分布與人極為接近，是迄今為止最為敏感的流感病毒感染動物模型。它對人流感病毒高度易感，病毒不經(jīng)適應(yīng)即能使雪貂致病，并易傳播給雪貂和人。在自然條件下，雪貂一般也是通過呼吸道吸入病毒的方式感染流感病毒，其感染后的發(fā)病過程和機體反應(yīng)也與人體相似。雪貂除對人流感病毒高度易感外，對禽流感、豬流感病毒也十分敏感，且感染后出現(xiàn)典型癥狀。

分子生物學研究顯示，這是由于雪貂的呼吸道上皮細胞表面存在人流感病毒特異性受體α2,6糖鍵連接的唾液酸，而其肺泡上皮細胞表面也存在著禽流感病毒特異性受體α2,3糖鍵連接的唾液酸。

概括起來，相較于其他流感動物模型，雪貂的優(yōu)勢為 ：（1）雪貂感染流感病毒后的癥狀、發(fā)病機制和免疫反應(yīng)與人類極為相似。（2）人甲、乙型流感病毒均可自然感染雪貂，這為在完全控制的群體內(nèi)觀察流感的傳播規(guī)律和流感病毒抗原性的漂移和轉(zhuǎn)變提供了可能。（3）雪貂的氣管較長，這樣就使其上、下呼吸道區(qū)室化，有利于研究流感病毒對呼吸道不同區(qū)域的效應(yīng)差異。（4）雪貂作為動物模型比嚙齒類大，易于監(jiān)測其體溫、脈搏和呼吸頻率。（5）在小型動物中，雪貂是唯一感染甲型流感病毒后自然出現(xiàn)發(fā)熱反應(yīng)的動物模型。基于此，目前雪貂作為理想的流感動物模型已被廣泛應(yīng)用于流感發(fā)病機理等各方面的研究，為人類流感研究做出了重要貢獻。

去勢雪貂（Mustela Pulourius Furo），4-10月齡，500-1000克。實驗前進行血清學檢查，HI方法檢測血清H3N2、H1N1、H5N1抗體，抗體陰性為合格雪貂方可入組實驗。

病毒株為A/Brisbane/10/07 (H3N2)，雪貂經(jīng)輕度麻醉后滴鼻感染H3N2病毒。實驗的觀察期為5天。皮下植入體溫芯片用于監(jiān)測體溫、體重變化。每日觀察雪貂臨床癥變化，在感染后第5天安樂動物，取組織樣本用于監(jiān)測病毒復制動力曲線和動物感染后組織炎癥反應(yīng)檢查。

流感病毒是嚴重威脅人類健康的一種病原體，它能導致流感疫情甚至世界大流行，流感在各個年齡階段的人群中都可能爆發(fā)而引起急性發(fā)熱性呼吸道疾病。流感病毒為單股負鏈RNA病毒，屬于正黏液病毒科，呈球形或絲狀，直徑80-120nm。病毒外層為兩種不同糖蛋白構(gòu)成的輻射狀突起，即血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)。根據(jù)HA和NA抗原的不同,又可分為許多亞型，H可分為16個亞型，N有9個亞型(N1～N9)。H3N2亞型流感病毒1968年最早出現(xiàn)于香港，后傳播到日本、美國等地，引發(fā)了一場流感世界大流行，致死人數(shù)達到近100萬人。此后，雖未再次引起世界大流行，但散發(fā)流行至今。近年來，世界范圍的流感流行病學監(jiān)控和調(diào)查分析顯示，該亞型流感病毒在仍是流行優(yōu)勢株，僅1968-1992年間我國發(fā)生的10次流感小流行中就有7次都是由H3N2流感病毒所引起，并且在1998年和2002年我國也都發(fā)生了較大范圍的H3N2流感流行，其中北京市1998年11-12月的人群總發(fā)病率高達10%，總發(fā)病人數(shù)達到了100萬以上。

疾病臨床表現(xiàn)及致病機制

人感染H3N2流感病毒后，癥狀與普通人流感相似，臨床表現(xiàn)包括發(fā)熱（病毒感染發(fā)熱一般是持續(xù)的，但下午較其他時間溫度要高）、咳嗽、喉嚨痛、身體疼痛、頭痛、發(fā)冷和疲勞等，有些還會出現(xiàn)腹瀉和嘔吐，重者會繼發(fā)肺炎和呼吸衰竭，甚至死亡。H3N2流感病毒傳播速度快，人體對新變異病毒沒有天然抗體。一般通過打噴嚏、咳嗽和物理接觸方式傳播。感染病毒的患者以青壯年為主，大多數(shù)年齡在25歲至45歲之間。 由于個人免疫情況不一樣，年輕人、兒童感染后，更容易出現(xiàn)流感樣的癥狀，體溫超過38℃，全身肌肉酸痛。老年人的反應(yīng)就不會那么強烈，好多老年人感染后體溫就不會很高，機體反應(yīng)沒有兒童敏感。

目前為廣大學者接受的H3N2流感病毒致病機制主要有如下幾種：①病毒誘導宿主細胞產(chǎn)生凋亡是其致細胞病變的重要機理之一；②病毒感染后對細胞造成的氧化應(yīng)激損傷也是學者普遍接受的致病機制；③細胞因子風暴學說等其他學術(shù)學說和理論。以上3種機制相互聯(lián)系，并且均與凋亡密切相關(guān)。

流感病毒感染機體后，可損害呼吸道上皮、肺上皮細胞，也可損傷肺外器官。不管在體內(nèi)或體外流感病毒都可誘導宿主細胞凋亡，流感病毒誘導細胞凋亡可能是通過多條途徑實現(xiàn)的，各條途徑又互相聯(lián)系，參與成分既有病毒的，也有細胞成分。整個過程由于多種細胞因子及病毒蛋白的參與而變得錯綜復雜。病毒感染引起宿主細胞凋亡損害宿主，但另一方面，宿主也通過這一方式限制病毒在機體內(nèi)的增殖和擴散。病毒感染細胞后，若細胞迅速發(fā)生凋亡，則不利于病毒的繁殖。