1.該模型制備比較成熟，國內(nèi)外都有此模型，構(gòu)建和評價指標一致，所以該模型應(yīng)用廣泛，具有統(tǒng)一的操作規(guī)程。

2. 該模型制備的關(guān)鍵：1）小鼠必須是重度免疫缺陷的，而且飼養(yǎng)環(huán)境必須潔凈；2）HIV操作需要生物安全。

3.此模型具有完善的人的免疫系統(tǒng)，HIV感染后，具有艾滋病病人相似的臨床癥狀，所以具有很高的比較醫(yī)學(xué)應(yīng)用價值。

1、 臨床癥狀

實驗猴在感染后14天出現(xiàn)食欲減退，并持續(xù)兩周左右，體重有所下降，有淺表淋巴結(jié)腫大。

2、 SIVmac251陰道感染恒河猴外周血病毒載量結(jié)果

S142猴經(jīng)SIVmac251陰道感染后10d檢出病毒載量陽性，之后迅速上升，在14d達到高峰，峰值為6.48×107，隨后迅速下降（圖1）。分別經(jīng)三種不同途徑（靜脈途徑、直腸途徑和陰道途徑）感染的實驗猴在SIVmac251感染后血漿病毒載量的變化趨勢基本一致，但病毒檢出時間稍有不同，首先是靜脈感染猴S153在3d檢出陽性，其次為直腸感染猴S172在7d檢出陽性，最后是陰道感染猴S142在10d檢出陽性。

圖1 SIVmac251不同途徑感染恒河猴血漿病毒載量結(jié)果

Fig.1 Viral load in plasma of SIVmac251-inoculated rhesus monkeys bydifferent route

1、 SIVmac251陰道感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值結(jié)果

S142猴經(jīng)SIVmac251陰道感染后CD4+/CD8+比值持續(xù)下降到第7d開始回升，到第10d時出現(xiàn)一個反彈峰，隨后CD4+/CD8比值又繼續(xù)下降，直到28天時下降到最低點，發(fā)生比例倒置。在急性期，S142猴的CD4+/CD8+比值一直在1以下波動。（圖2）。三只不同途徑感染的實驗猴CD4+/CD8+變化趨勢基本保持一致，S172（直腸感染猴）和S142（陰道感染猴）倒置的比S153（靜脈感染猴）嚴重。

圖2 SIVmac251不同途徑感染恒河猴CD4+/CD8+比值

Fig.2 CD4+/CD8+ ratio of SIVmac251-inoculated rhesus by different route

1、 SIVmac251陰道感染恒河猴血漿抗體檢測結(jié)果

S142猴經(jīng)SIVmac251陰道感染后在第14d時血漿抗體均轉(zhuǎn)為陽性，在21d時血漿抗體滴度緩慢上升，到42d時開始急劇上升，直到第56d，血漿抗體最高到1:640（圖3）。靜脈感染猴S153在第10d時最早檢出陽性，隨后抗體滴度平緩上升，直到第56d；直腸感染猴S172在第14d時血漿抗體均轉(zhuǎn)為陽性，在21d時S172血漿抗體滴度迅速上升，42d時S172開始急劇上升，直到第56d，S172最高到1:1280。

圖3 SIVmac251不同途徑感染恒河猴血漿抗體檢測結(jié)果

Fig.3 The result of antibody in plasma after SIVmac251inoculate rhesus by different route

1、 實驗用病毒：感染毒株為SIVmac251中國恒河猴細胞適應(yīng)株，病毒原液TCID50為2×107/mL。

2、 感染動物：選用體重4-6kg的SPF恒河猴。實驗前體檢無異常，必須排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆轉(zhuǎn)錄D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴細胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相關(guān)的4種基因（Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17）篩查結(jié)果為陰性。所有感染動物必須在ABSL-3室中進行。

3、 感染方法：將麻醉好的實驗猴放在操作臺上，動物采取俯臥位，后肢抬高，暴露陰道口。用2mL預(yù)冷的無菌PBS清洗陰道。再將1mLSIVmac251病毒原液緩慢推入。實驗猴保持此姿勢30min。

4、 SIVmac251陰道感染猴樣品采集和指標測定：在感染前和感染后3、7、10、14、17、21、28、42、56天采集EDTA抗凝血4mL，分別測定血漿病毒載量、CD4+/CD8+比值及血漿抗體測定。

5、 SIVmac251陰道感染猴血漿病毒載量的測定：提取EDTA抗凝血漿中病毒RNA，使用SYBR Green I 實時熒光定量RT-PCR方法測定血漿病毒載量。

6、 SIVmac251陰道感染猴外周血CD4+/CD8+比值測定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗體標記EDTA抗凝全血淋巴細胞，流式細胞儀測定CD4+/CD8+比值。

7、 SIVmac251陰道感染猴血漿抗體測定：免疫熒光法（IFA）檢測感染猴血漿中的抗體水平。

一、 艾滋病概述

艾滋病(AcquiredImmunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系統(tǒng)嚴重損害為特征的傳染性疾病，是20世紀危害人類健康和生命最嚴重的病毒性疾病之一。自美國CDC報道首例艾滋病后，到20世紀80年代中期艾滋病發(fā)展成為一個性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690萬人，2014年新增感染者200萬，2014年因艾滋病死亡120萬人。艾滋病在1985年傳入我國，截至2015年5月31日，歷年累計報告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成為關(guān)注的公共衛(wèi)生和社會熱點問題，艾滋病的預(yù)防與治療也成為當代生物醫(yī)學(xué)研究的前沿?zé)狳c之一。

二、艾滋病動物模型簡介

艾滋病發(fā)病機制研、藥物和疫苗的保護性研究及評價等方面在很大程度上依賴理想的動物模型。人們發(fā)現(xiàn)HIV以后，用HIV感染過多種動物，但由于種種原因，結(jié)果并不理想。研究發(fā)現(xiàn)猴免疫缺陷病毒(SIV)感染實驗用猴的模型效果比較理想，表現(xiàn)為和AIDS的臨床表征，發(fā)病過程、免疫缺陷特征等非常相似，加之HIV和SIV有一定的基因同源性，人和猴的生物學(xué)特性也較其他動物接近，因而，SIV/SAIDS(猴艾滋病)模型被廣泛接受和應(yīng)用。

SIV是猴獲得性免疫缺陷綜合征（SimianImmune Deficiency Syndrome，SAIDS）的主要致病病毒，為典型的C型病毒粒子，基因組長度大約為9.2kb，基因組成同HIV-1和HIV-2基本相同，其完整的原病毒基因含有二個LTR以及同HIV類似的基因：gag、pol、vif、tat、rev、env和nef。所有基因在SIV的排列順序同HIV完全一樣。目前國內(nèi)外對SIV的研究多集中在非克隆株SIVmac251和克隆株SIVmac239上，因為這兩個病毒株能在多種獼猴屬動物身上引發(fā)致死性免疫缺陷綜合征，同時伴有CD4+淋巴細胞下降，繼發(fā)機會性感染病毒性腦膜腦病。這些都與人類AIDS類似。

艾滋病的三種傳播途徑分別是經(jīng)血液、性和母嬰傳播，性傳播包括同性傳播和異性傳播兩種方式。艾滋病動物模型的制備首先要考慮其實際應(yīng)用價值，最好的動物模型可以最大限度的模擬人類疾病，包括使用與自然感染相同或接近的方式建立模型。為模擬異性間性傳播的感染方式，通過陰道粘膜上皮途徑接種病毒，病毒可能直接感染郎格漢斯細胞、上皮細胞等。在靈長類動物AIDS模型的研究中發(fā)現(xiàn)體內(nèi)注入黃體酮可促進SIV/SHIV傳播，而雌激素則抑制SIV/SHIV傳播，可能與這些激素能影響陰道壁厚度或通過IL-2等影響CCR5和CXCR4受體表達有關(guān)。在合適的生理周期或使用一定量的黃體酮的情況下，用導(dǎo)尿管將病毒緩慢注入猴陰道內(nèi)，可建立異性性傳播動物模型。